目的 研究体外BMSCs向光感受器样细胞分化过程中的差异蛋白质,探讨BMSCs定向分化的标记和蛋白调控机制。 方法 取第4~6代的人BMSCs细胞株进行实验。细胞培养诱导分化同前。实验分两组:MSCs组和诱导组(诱导后7d的细胞)。通过2D-DIGE双向电泳技术及MALDI-TOF-MS分析,共鉴定出32个差异表达蛋白。Western-blot进一步验证了Zyxin、β- tropomyosin的差异表达。 结果 共鉴定出32个差异表达蛋白,其中11个蛋白质表达上调,21个蛋白质表达下调,建立了BMSCs向光感受器样细胞诱导分化7d后的差异表达蛋白谱。鉴定出的蛋白质分为7类:细胞骨架蛋白、分子伴侣、能量代谢的激酶、信号转导通路相关蛋白、细胞增殖、分化和凋亡相关蛋白、钙结合蛋白和离子通道及其他蛋白。研究发现β- tropomyosin、p38、人类增殖细胞核抗原C链表达下调,肌球蛋白、线粒体的热休克蛋白60 kD蛋白质1变异体1、含硫氧还蛋白域蛋白质5亚型3表达上调,表明在诱导过程中发挥着重要的调控作用。Western-blot验证了诱导后细胞Zxyin和β- tropomyosin表达呈下调趋势。 结论 应用差异蛋白质组学的方法,建立了BMSCs诱导分化为光感受器样细胞的差异蛋白质组图谱,初步分析了BMSCs诱导分化为光感受器样细胞潜在的分子机制。
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