目的 观察兔角膜缘上皮细胞在丝素蛋白-聚乳酸-聚己内酯共聚物(SF-PLCL)纳米纤维薄膜上的黏附、生长、增殖和分化等,研究SF-PLCL纳米纤维薄膜作为组织工程角膜上皮支架材料的可行性。 方法 以六氟异丙醇(HFIP)为溶剂,配制浓度为8%的丝素蛋白(SF)和聚乳酸-聚己内酯共聚物(PLCL)的共混物(质量比25:75)的纺丝溶液,通过静电纺丝技术制备纳米纤维膜。取兔角膜缘组织块,利用中性蛋白酶Ⅱ消化分离角膜缘上皮与基质,再用胰酶-EDTA将上皮消化为单细胞悬液,获得原代角膜缘上皮细胞,传代扩增至第二代。将细胞种植于SF-PLCL纳米纤维薄膜上进行体外培养,培养两周。CM-DiI标记细胞,荧光共聚焦显微镜观察其在材料上的分布;通过扫描电镜观察细胞材料复合物的表面形貌;MTT分析细胞在支架材料上的增殖能力;免疫荧光染色、RT-PCR分析角膜上皮细胞的特异性蛋白标志表达情况。 结果 荧光共聚焦显微镜和扫描电镜显示角膜缘上皮细胞在材料上黏附生长良好,细胞均匀分布,并保持正常上皮细胞多边形形态;MTT分析表明细胞在材料上的生长代谢正常,细胞随着培养时间逐渐增多;免疫荧光染色和RT-PCR分析表明在材料上生长的角膜缘上皮细胞的特异性分子和蛋白标志表达正常。 结论 角膜上皮细胞与SF-PLCL纳米纤维膜的生物相容性良好, SF-PLCL纳米纤维膜可以作为组织工程角膜上皮的支架材料。 |