目的  研究先天性白内障相关的βB2晶状体蛋白致病突变A2V对蛋白结构、稳定性和蛋白相互作用的影响。

方法  1.野生型和突变型蛋白表达载体构建：以人晶状体上皮细胞总RNA为模版，PCR反转录出βB2晶状体蛋白的编码序列，在pET28a质粒上构建野生型βB2和A2V突变体的原核表达载体；2.表达并纯化融合蛋白：在大肠杆菌中大量表达融合蛋白，先后通过镍柱亲和层析和分子筛层析纯化目的蛋白，并用SDS-PAGE检测蛋白均一性；3.检测野生型和突变型蛋白在天然状态下的圆二色谱、内源性色氨酸荧光、ANS荧光，分析两者在二、三级结构上的差异；4.SEC检测蛋白结构紧密程度和寡聚状态；5.观察蛋白在热变性条件下的聚集和盐酸胍变性条件下的光谱学变化，比较两者稳定性差异；6.通过SEC和Native-PAGE比较野生型和突变型βB2蛋白与βA3蛋白形成异源寡聚体的能力有无差异；7.通过监测浊度，比较完全变性后的βB2蛋白在复性过程中的动力学曲线。

结果  野生型和A2V突变型人βB2晶状体蛋白在二、三级结构上无明显差别，在盐酸胍环境中的变性和复性过程没有差异，与βA3蛋白形成异源寡聚体的能力也基本相同；但是，在较高浓度下，野生型βB2较A2V突变体倾向于形成更高形态的寡聚体，而且在高温条件下，野生型βB2教突变蛋白更稳定，A2V突变体会相对容易发生聚集。

结论  βB2晶状体蛋白的A2V突变不影响蛋白本身的结构，但会影响其形成高形态寡聚体的能力，从而在一定程度上影响其稳定性，这可以解释携带这一致病突变的先天性白内障患者，其体征不是在出生时就存在，而是在较晚年龄才被发现的原因。