| 目的 第一部分：研究国产美罗培南兔眼玻璃体注射对视网膜的毒性作用，得出玻璃体注射的安全剂量。
第二部分：研究安全剂量的美罗培南在兔眼玻璃体内的药代动力学，得出半衰期。
方法
第一部分：健康成年日本大耳白兔16只，随机分为4组，每组4只，各组右眼(实验眼)玻璃体分别注射0.625 mg、1.25 mg、2.5 mg、5.0 mg的美罗培南生理盐水稀释液0.1 ml， 对照眼（左眼）玻璃体均注射等量的生理盐水0.1ml。通过下列检查项目评价美罗培南对视网膜的毒性：
(1) 直接检眼镜检查：分别于注射前及注射后10 min、24 h、3 d、7 d、14 d观察实验眼及对照眼的晶状体、玻璃体及视网膜情况；
(2) 暗适应闪光视网膜电流图（ERG）检查：注药前记录暗适应ERG得出右眼与左眼的B波比值的平均值，作为正常对照值；分别于注药后3 d、14 d，处死前记录暗适应ERG，得出右眼与左眼的B波比值的平均值, 比较注药前后B波比值的差异性，应用SPSS11.5软件进行均数t检验(p<0.05, 有显著性差异)。
(3) 电镜检查：分别于注药后3 d和14 d，每组处死两只兔子摘除眼球,电镜下观察视网膜超微结构的改变。
第二部分：健康成年日本大耳白兔18只，共36只眼。双眼玻璃体均注射美罗培南生理盐水稀释液1.25 mg/0.1ml。分别于注药后0.5、1 、2 、3 、4 、6 、8 、12 、24 h等9个时间点，各随机处死两只兔子，共4只眼，采集房水和玻璃体样本，应用高效液相色谱法（high-performance liquid chromatography,HPLC）进行药物浓度检测分析。色谱条件包括色谱柱： ZORBAX EclipseXDB-C8 ( 4.6×150 mm, 5 μm , Agilent, USA )； 流动相 乙腈：水＝10：90；流速0.8 ml/min；检测波长298 nm；参比波长400 nm。取峰面积之比（Ai/As）与浓度进行回归。应用HPLC法分析求出各时间点的药物浓度，应用3P97药代动力学软件程序进行数据处理，得出美罗培南在玻璃体内的半衰期。
结果
第一部分：视网膜毒性研究
(1) 直接检眼镜检查：注药后各观察时间点，0.625 mg组，1.25 mg组及2.5mg组三组双眼均未见异常。5.0 mg组，注药后24 h，右眼视网膜水肿，3d后减轻，14 d后消失，但左眼未见异常。
(2) 暗适应闪光视网膜电流图（ERG）检查：注药后3 d及14 d，0.625 mg组和1.25 mg组的注药前后B波比值无显著性差异（ P > 0.05 ），而2.5 mg组和5.0 mg组的B波比值与注药前相比较明显减低，有显著性差异（P < 0.05）。
(3) 电镜检查：注药后3 d和14 d，0.625 mg组和1.25 mg组的实验眼与对照眼超微结构均未见异常改变。2.5 mg组，注药后3 d，色素上皮细胞破裂，大量髓样小体，微绒毛消失，感光细胞外节短缺，局部可见大量细胞碎片；注药后14 d，感光细胞内节崩裂，大量的细胞碎片。5.0 mg组，注药后3 d，色素上皮层消失，外节可见大量的细胞碎片；注药后14 d，色素上皮层结构紊乱，大量的色素颗粒，细胞碎片及空泡，外丛层突触联系差。2.5 mg组和5.0 mg组, 注药后3 d和14 d，内核层及内丛层均未见异常改变。
第二部分：药代动力学研究
本法测定玻璃体内的美罗培南浓度在50～2500 μg/ml之间有良好的线性关系。回归方程C＝1.4735 × Ai/As＋0.0171（n＝5，r＝0.9991）。最低检测浓度是50 μg/ml。玻璃体的平均回收率是98.93％，日内精密度平均相对标准差是3.03％，日间精密度平均相对标准差是5.49％。1.25 mg美罗培南玻璃体腔注射后，玻璃体内的平均药物浓度由0.5 h的756 ± 69 μg/ml下降到24h的55 ± 15 μg/ml。房水中测不出美罗培南。玻璃体内的半衰期（T1/2）是6.725 ± 0.634 h，24 h后玻璃体腔内美罗培南的浓度仍高于对大多数细菌的最低抑菌浓度。
结论
(1) 美罗培南兔眼玻璃体腔注射1.25 mg对视网膜无明显毒性损害，可以认为是玻璃体腔注射的安全剂量。
(2) 1.25 mg美罗培南玻璃体腔注射的半衰期是6.725 h，24 h后玻璃体腔内的药物浓度仍有抗菌效应。 |
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