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脂质体介导Endostatin基因转染大鼠视网膜色素上皮细胞抑制脉络膜新生血管的实验研究         
脂质体介导Endostatin基因转染大鼠视网膜色素上皮细胞抑制脉络膜新生血管的实验研究
作者:尚庆丽 马… 文章来源:河北医科大学第二医院眼科 050000 点击数:1404 更新时间:2004/6/29
目的 探讨LipofectamineTM2000(LF2000)脂质体介导Endostatin基因体内转染对CNV模型的抑制效果,方法 雄性Brown Norway大鼠60只,激光光凝方式建立CNV模型,随机分为Endostatin治疗组,空质粒组,对照组,各组20只,以脂质体介导法将重组Endostatin基因真核表达载体pSecTagA-hEndostatin和空载质粒pSecTagA分别导入Endostatin治疗组及空质粒组视网膜下腔,对照组注射生理盐水。采用原位杂交和免疫组化检测眼局部Endostatin基因组mRNA转录及Endostatin蛋白表达,ELISA法检测眼及血浆Endostatin蛋白表达水平;通过脉络膜血管平铺激光共聚焦显微镜、FFA、CD105免疫组化、光镜等指标观察对CNV的抑制效果。结果 经LF2000脂质体介导Endostatin基因可有效转染视网膜内、外丛状层、视杆、视椎层,RPE及脉络膜并得到表达。转基因后7及14天测得眼组织均浆Endostatin蛋白表达量为506.14±63.41ng/ml和331.5±42.21ng/ml,血浆中Endostatin表达量为25.6±4.65ng/ml,15.6±2.19ng/ml,而空质粒组和对照组Endostatin表达量低于基准值(15.6pg)。Endostatin治疗组,CNV面积小于空质粒组及对照组(F=341.13;p<0.001);各光凝斑荧光渗漏程度评分结果,Endostatin与空质粒组及对照组间差别具显著意义(x2=17.54;p<0.001);光凝后14天,空质粒组对照组光凝区脉络膜层增厚,脉络膜毛细血管层内皮细胞大量增殖,光凝斑附近大量CD105阳性表达细胞;Endostatin组内皮细胞增生数量明显少于前两组,CD105的阳性表达量明显降低。结果 脂质体介导的Endostatin基因体内转染可以有效抑制CNV的形成。
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