| 目的 探讨增生细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen ，PCNA）核酶(Ribozyme,Rz）对PCNA表达及细胞增生的影响,为进一步基因治疗增生性玻璃体视网膜病变提供实验基础.方法 设计构建针对PCNA的核酶(PcnaRz),检测其对PCNA mRNA的体外切割、分解能力,通过阳离子脂质体介导转染体外培养的视网膜色素上皮细胞及成纤维细胞,观察其在细胞中的分布,应用3H-TdR掺入实验及MTT实验检测细胞增生及活性,应用免疫组织化学及RT-PCR技术检测细胞内PCNA表达水平,并设立空白对照组、空载体组和变性核酶组进行对照研究。结果 PcnaRz能有效切割PCNA mRNA，37℃时切割效率为60.24%：在脂质体介导下PcnaRz可成功转染RPE及成纤维细胞，并有较高转染效率；核酶组细胞增生活性显著低于对照组、空载体组及变性核酶组；细胞生长抑制率显著提高（82.16%，P均＜0.01）；核酶组细胞PCNA表达水平显著低于其他组（P均＜0.01）. 结论 PcnaRz在体外能有效分解PCNA mRNA并能成功抑制培养的兔RPE及成纤维细胞中PCNA的表达,降低细胞的增生活性,有望成为防治增生性玻璃体视网膜病变的有效手段. |
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