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| 低氧诱导因子1α的小干扰RNA抑制视网膜新生血管的体外研究 |
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作者：熊思齐 夏… 文章来源：中南大学湘雅医院眼科（41008） 点击数：1358 更新时间：2005/6/13 22:24:01 
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| 背景：视网膜新生血管的发生与缺氧有关，缺氧状态下低氧诱导因子1α（HIF-1 alpha）作为关键的转录因子上调血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达，从而促进视网膜新生血管的发生。
目的：从体外研究入手，研究pSUPERH1-siHIF-1α真核表达载体在正常氧及缺氧条件下对HIF-1α的抑制效率及由此引起的血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达差异，为后续的活体研究提供体外实验依据。
方法：将已构建的pSUPERH1-siHIF-1α真核表达载体（能在真核细胞内表达HIF-1α特异性siRNA的质粒）转染高表达HIF-1α 的低分化鼻咽癌细胞（CNE2）。通过嘌呤霉素筛选，建立能稳定表达HIF-1α siRNA的细胞系。采用半定量RT-PCR的方法鉴定出HIF-1α 抑制效率最高的细胞系。然后将该细胞系、空载体转染的CNE2细胞及未转染的CNE2细胞在正常氧（20% O2）及低氧环境（1% O2）下培养,采用半定量RT-PCR及免疫印记（Western blot）技术观察正常氧及低氧环境下HIF-1a的抑制效率。并采用半定量RT-PCR及ELISA技术检测相应VEGF的表达差异。
结果：1）建立的稳定表达 HIF-1α siRNA的细胞系中，源于六号单克隆细胞的细胞系（clone-6）HIF-1α 的抑制效率最高。
2）半定量RT-PCR及Western blot结果表明正常氧及低氧环境培养下，相对于空载体转染组及未转染细胞组， clone-6中HIF-1α 的mRNA及蛋白表达水平受到明显抑制。
3）厌氧环境培养下，clone-6中VEGFmRNA及分泌型蛋白水平较空载体转染组及未转染细胞组有明显下调。而正常氧环境培养下，clone-6中VEGFmRNA及分泌型蛋白水平与对照组比较差异无显著性。
结论： 在厌氧培养环境下，pSUPERH1-siHIF-1α真核表达载体能显著抑制HIF-1α 的表达，且显著下调VEGF的表达；而正常氧环境培养下，抑制HIF-1α 对VEGF的表达则无明显影响。因此，pSUPERH1-siHIF-1α真核表达载体可能为视网膜新生血管的基因治疗提供新的途径。
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| 会议投稿录入：petersage 责任编辑：毛进 |
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