目的 观察角膜创伤愈合过程中,结缔组织生长因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)及转化生长因子β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)的表达、对创伤愈合的作用,并对二者之间的相互作用及与此有关的Smad信号传导通路做初步的探讨。方法 随即选择Albino纯种白兔30只,设空白对照,实验眼首先施一直径3毫米,包含0.05mm实质层的板层角膜切除术,部分术眼球结膜下注射TGF-β1抗体或smad4抗体,用免疫组化及mRNA原位杂交方法分别检测CTGF、TGF-β1、FN(fibronectin,纤维粘连蛋白)蛋白术后2h 、6h、1天、3天、7天、21天的表达及Ⅰ型胶原、CTGF mRNA在术后6h、3天、7天、21天的表达;角膜实质细胞活化增生情况。结果:正常兔眼角膜未发现CTGF蛋白及mRNA的表达。TGF-β1蛋白在正常角膜上皮中有表达。术后6小时角膜实质细胞开始活化,创伤后TGF-β1在上皮及实质中的表达显著增加,同时CTGF mRNA表达上调;术后第3天TGF-β1蛋白、CTGF及Ⅰ型胶原mRNA的表达到高峰;术后7天,三者在上皮中表达明显,TGF-β1蛋白在实质中表达减少;术后21天,绝大多数纤维细胞恢复到伤前状态,CTGF蛋白及mRNA在上皮中偶见表达。TGF-β1中和抗体抑制上皮和实质TGF-β1、CTGF蛋白与CTGF mRNA的表达,延缓角膜上皮的修复。Smad4抗体对CTGF表达的无影响,但可下调TGF-β1蛋白在实质层的表达。结论:创伤能引起TGF-β1蛋白、CTGF蛋白及mRNA的表达增加,Ⅰ型胶原及FN合成增加。TGF-β1促进实质细胞活化,上调CTGF的表达;CTGF主要调节Ⅰ型胶原及FN生成,从而影响角膜伤口愈合及斑痕形成;这两种调节作用均不通过Smad通路传导。
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