| 目的：观察酪氨酸蛋白激酶（PTK）抑制剂-Genistein对白介素-1β(IL-1β)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞趋化因子白介素-8（IL-8）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响,并对细胞内第二信使Ca2+浓度的变化进行研究,从细胞信号传导通路入手探讨RPE细胞分泌趋化因子的机制和抑制方法。
方法： 培养人PRE细胞株,采用0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml三种浓度IL-1β对人RPE细胞进行刺激，RT-PCR法观察RPE细胞IL-8和MCP-1mRNA表达的变化，MTT法观察RPE细胞增生的变化，划线法观察RPE细胞迁移的变化。应用2ug/ml、10ug/ml、50ug/ml三种浓度的genistein对人RPE细胞培养进行干预，观察其对IL-1β诱导IL-8和MCP-1mRNA表达的影响。Fura2/AM与RPE细胞共同孵育,应用荧光分光光度计对三种浓度IL-1β刺激后以及genistein干预后RPE细胞内Ca2+浓度的变化进行检测。
结果： 0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/mlIL-1β对人RPE细胞的增生都有促进作用（P<0.01），而对细胞迁移没有明显促进作用。RT-PCR结果显示0.1ng/mlIL-1β刺激的人RPE细胞表达IL-8与对照组相比差异没有显著性（P>0.05），1ng/ml、10ng/mlIL-1β与对照组相比差异有显著性（P<0.01）。0.1ng/ml、1ng/mlIL-1β刺激的人RPE细胞表达MCP-1与对照组相比差异没有显著性（P>0.05），10ng/mlIL-1β与对照组相比差异有显著性（P<0.01）。2ug/mlgenistein对人RPE细胞IL-8mRNA的表达没有明显抑制作用（P>0.05）， 10ug/ml、50ug/mlgenistein对人RPE细胞IL-8mRNA的表达有明显的抑制作用（P<0.05）。2ug/ml、10ug/ml、50ug/mlgenistein对人RPE细胞MCP-1mRNA的表达均有明显的抑制作用（P<0.05）。荧光分光光度计结果显示0.1ng/mlIL-1β对RPE细胞内Ca2+浓度没有明显影响, 1ng/ml、10ng/mlIL-1β引起RPE细胞内Ca2+浓度升高, 10ng/ml作用要明显强于1ng/ml。2ug/ml、10ug/ml、50ug/ml三种浓度的genistein均可引起RPE细胞内Ca2+浓度的显著下降，与IL-1β对细胞内Ca2+浓度作用完全相反，其作用具有浓度依赖性。
结论：白细胞通过在浸润区产生超氧离子和炎症细胞因子在组织损伤中起着非常重要的作用。白细胞的浸润过程受多个步骤调节，其中趋化因子起着非常关键的作用。在视网膜和脉络膜疾病中IL-8和MCP-1等趋化因子扮演重要角色。本实验发现人RPE细胞在IL-1β刺激下表达IL-8 和MCP-1mRNA具有剂量依赖性，Genistein对其有明显的抑制作用，其作用可能通过降低IL-1β所引起的细胞内Ca2+升高，阻断了细胞信号传导有关。PTK信号传导通路参与了IL-1β诱导的IL-8 和MCP-1表达。通过阻断PTK通路可能在某些视网膜和脉络膜疾病中产生治疗作用。 |
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