目的:应用高效液相色谱法测定给中药熊胆粉后家兔玻璃体内其标志成份牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)的含量,以指导临床用药。
方法:白兔空腹12h后,给予100mg/kg熊胆粉灌胃,分别在给药后0.5h,1h,2h,4h,6h,8h 生理盐水结膜囊冲洗后,在倍诺喜表面麻醉下,将双眼睫状体扁平部热凝,以防血液混入,再迅速以1ml注射器穿刺取玻璃体0.3-0.34ml ,冷藏,12h内送检。经过样品预处理后,应用DiamonsilTM(钻石)5μm 250╳4.6mm色谱柱,流动相为甲醇0.03mol/L,磷酸二氢钠溶液(60:40),用磷酸缓冲液调PH值至4.4;TUDCA的紫外检测波长为210nm;流速为1.0ml/min进行检测。
结果:平均回收率为99.32 %,RSD为0.98%(n =5),玻璃体样品进样量与吸收峰面积呈良好的线性关系。线性范围为10~60µg/mL。
结论:该方法测定给中药熊胆粉后家兔玻璃体中TUDCA的含量, 此方法灵敏、特异、结果准确 , 重现性好。
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