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目的：探讨人角膜缘上皮细胞建系过程中，细胞生物学特性，蛋白表达，生长动力学，染色体，致瘤性等特征变化。
方法：采用消化培养法，组织块培养法，饲养层培养法体外培养人角膜缘上皮细胞，连续传代，纯化后建立细胞系。培养过程中采用免疫细胞组化，Western blot方法鉴定细胞中上皮细胞特异性蛋白-角质蛋白3（CK3），增殖细胞核抗原（PCNA），转录因子P63的表达；细胞传代培养4h, 6h分别收集未贴壁细胞，计算细胞贴壁率；用MTT法描绘细胞生长曲线，计算细胞倍增时间；进行细胞染色体分析；用Transwell培养板形成气液界面进行上皮细胞复层形成实验；采用裸鼠颈背部皮下接种第30代上皮细胞的方法检测细胞致瘤性。
结果：人角膜缘上皮细胞在体外已经成功传代45代，细胞的增殖活性良好，呈上皮细胞形态，细胞表达CK3，PCNA，第5代前细胞有P63表达，5代后细胞渐无表达；40代细胞的4h, 6h贴壁率分别为40.7%，62.5%；P1，P15，P20，P40代细胞的倍增时间分别为31.5h, 24.4h, 26.4h, 25.8h; 染色体分析结果表明细胞为多倍体，异倍体核形；细胞在气液界面条件下可以形成2-3层角膜上皮；裸鼠体内接种80天未观察有肿瘤的生长。
结论：建立的人角膜上皮细胞系具备上皮细胞的基本特征，为角膜病在细胞水平的研究和组织工程化角膜的构建提供了细胞来源。
﹡本研究受国家重点基础研究发展规划项目973子课题（G1999054309-6）、国家高技术研究发展计划（863计划）（2003AA205050）、广东省科技计划项目:组织工程重大专项（A302020101）、广东省科技计划项目（2003A3020401）、教育部博士点基金（20030558074）。
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