| 目的：视网膜色素上皮(retina pigment epithelium，RPE)细胞层是血-眼屏障的重要组成部分，对于维持正常的视网膜有氧代谢起重要的作用，许多视网膜脉络膜疾病的发生都与RPE层的缺血缺氧密切相关。本研究用酶组织化学等方法，观察缺氧对人RPE细胞线粒体琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase，SDH)和细胞色素氧化酶(cytochrome oxidase，COX)活性的影响，以及缺氧对RPE细胞增生的作用。方法：氯化钴(Cobalt Chloride，CoCl2)法建立培养人RPE细胞缺氧模型。于缺氧后0.5、1、2、4、6、8、16和24h用酶组织化学法进行SDH和COX活性测定。于缺氧后第1、2、3、4和5d用四甲基偶氮唑蓝[3 (4,5 dimethylthiazole 2yl) 2,5 diphenyl tetrazolium bromide，MTT]比色法检测RPE细胞增生。结果：缺氧0.5h RPE细胞线粒体SDH和COX活性开始下降，随缺氧时间的延长持续下降，至缺氧16h时达到最低水平，分别为对照组的65.57%和84.05%。缺氧24h后RPE细胞SDH和COX活性表现出增高的恢复趋势。缺氧组RPE细胞线粒体SDH和COX活性与对照组有显著性差异(P<0.05)。缺氧1-5d内RPE细胞增生能力较对照组增强，缺氧组与对照组OD值相差显著(P <0.05)。结论：SDH和COX是线粒体重要的标志酶，其活性强弱反映了细胞有氧代谢的程度，缺氧可通过影响SDH和COX活性而影响线粒体氧化呼吸功能。缺氧状态下RPE细胞线粒体SDH和COX活性下降，提示RPE细胞有氧代谢供能降低、细胞机能活动下降，缺氧对SDH活性的影响较COX更为明显。缺氧24h后RPE细胞SDH和COX活性表现出增高的恢复趋势，提示RPE线粒体呼吸链的部分组成成分可在缺氧一定时间发生代偿性的活性增强。长时间缺氧可以刺激RPE细胞增生，缺氧状态下SDH的失活导致琥珀酸/延胡索酸含量的变化，启动了细胞的合成代谢，提示缺氧可通过使细胞周期加快促进细胞增生。研究缺氧状态下RPE细胞生物学特性及其功能的改变，对深入了解眼内疾病的发生有重要意义。 |
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