| 1. 目的
观察活化的巨噬细胞在体内对视神经损伤后视网膜神经节细胞存活及巨噬细胞条件培养基对体外培养成年大鼠视网膜神经节细胞存活的影响，评价活化的巨噬细胞对视神经的保护作用。
2. 方法
2.1 成年雄性Wistar大鼠随机分为二组，每组60只大鼠，A组左眼为正常对照组，右眼为单纯视神经夹伤组；
2.2 B组按夹伤后眼内注射药物不同，每只大鼠右眼为酵母多糖组，左眼为溶剂即PBS组。按视神经夹伤后存活时间不同即3、7、14天、21天分别将各组60只眼随机分入4个时间点，每个时间点15只眼。
2.3 采用双上丘和外侧膝状体注射3%荧光金标记双眼视网膜神经节细胞7天后，除正常对照组外均应用40g力的视神经夹在大鼠眼球后2mm处夹视神经9s。
将视网膜铺片图象输入计算机图象分析仪计数视网膜神经节细胞。
2.4 视网膜进行ED-1染色以鉴定是不是有巨噬细胞被激活。
2.5按每100μl培养液中加入25μl巨噬细胞条件培养基将视网膜神经节细胞悬液接种培养。
24小时后加入阿糖胞苷以抑制非神经细胞生长。每天于像差倒置显微镜下观察。
2.6 4%多聚甲醛固定后用Thy1.1抗体染色;
2.7 取培养3、5、7d的24孔培养板细胞,以MTT法测A值。
3. 结果
3.1 正常对照组、视神经夹伤组及PBS组中未见ED-1阳性巨噬细胞，酵母多糖处理组中在视网膜表面可见ED-1阳性巨噬细胞。
3.2 正常对照组及视神经夹伤对照组RGC逆行标记3、7、14、21天细胞数不同。
视神经夹伤组被标记的RGC分别相当于正常对照组的92.6%、82.9%、69.6%、57.6%，二者比较差异有极显著性（q=32.63,52.90,63.17,65.28，P<0.01）。
3.3 酵母多糖组及PBS组RGC标记数随时间延长逐渐下降（F=25.73，29.47，P<0.01）。
3.4 酵母多糖治疗组在夹伤后3天、7天、14天、21天标记的RGC数均较正常对照组低，二者比较差异具有极显著性（q=4.85,5.08,18.29,8.31, P<0.01）；
3.5酵母多糖组RGC数较视神经夹伤组高，二者有差异具有极显著性（q=28.32,49.91,42.25,49.55, P<0.01）；酵母多糖组RGC数较PBS组高 ，二者有差异具有极显著性（q=29.42,48.39,41.93,48.12, P<0.01）。
3.6 溶剂对照组RGC数较正常组低，（q=15.42,31.77,37.24,29.74, P<0.01），与视神经夹伤对照组相近，差异无显著性（（q=2.29,1.40,2.31,1.54, P>0.05）。
3.2.1 RGCs12小时开始贴壁，24小时完全贴壁，24小时部分细胞有轴突生长，3天有轴突相互连接，7天仍有少量细胞存活。
3.2.2 不同培养时间分组的RGC存活数，实验组及对照组不同培养时间不同RGC存活数，差异有极显著意义（F=39.55,46.72, P＜0.01）。实验组与对照组不同培养时间相比差异有极显著性(t=3.27,3.63,4.61,P<0.01)。
测定不同培养时间分组的存活RGC的A值，实验组培养第7天,与第3天比较差异有显著性(P<0.01)。实验组与对照组相比差异有显著性(P<0.01)。培养24h后细胞长出突起，且细胞分布稀疏、分散，无聚集生长的现象。48h后很少见到存活的细胞。加入MCM后存活的细胞数增多，同一时间内加MCM组与不加MCM组比较差异有显著性。
RGCs的纯度为94.7%±5.62%。
4. 结论
玻璃体内注射酵母多糖可激活巨噬细胞，激活巨噬细胞可以促进视神经损伤后视网膜神经节细胞的存活。
成功建立RGCs体外培养体系，并使较长期的纯化培养成为可能。
巨噬细胞条件培养基可促进体外培养的视网膜神经节细胞的存活，与对照组相比有显著差异。
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