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| 大鼠视网膜微血管内皮细胞的分离和培养 |
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作者：陈楠 陈… 文章来源：青岛市燕儿岛路5号山东省眼科研究所266071 点击数：2014 更新时间：2005/6/28 14:06:55 
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| 目的 探讨大鼠视网膜毛细血管内皮细胞的体外分离和选择性培养方法。方法 采用单纯的视网膜剪碎法获得活性较高的视网膜微血管碎片，结合0.25%胶原酶消化，经网孔100um的两层不锈钢细胞筛网过滤，翻转滤网广泛冲洗，收集洗脱液，室温下1000r/s离心 5min，去除上清液。细胞悬液接种于包被有纤维粘连蛋白（FN）的培养皿或24孔培养板上，然后放入37℃、5%CO2培养箱中培养，2-3天换液1次。培养液为含20%胎牛血清（FBS）、100ug/ml 肝素、10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、100u/ml 青霉素和链霉素的DMEM液。原代细胞培养5-6天细胞较少的时候可采用机械除杂法进行细胞分离。而在细胞传代时，可利用低浓度胰蛋白可消化视网膜内皮细胞而对周细胞影响不大及视网膜微血管内皮细胞较周细胞贴壁快的特点，进行除杂分离获得较纯大鼠视网膜微血管内皮细胞。传代细胞培养液为含10%FBS的DMEM液。所培养的细胞应用Ⅷ因子相关抗体通过免疫组化方法进行鉴定。结果 大鼠视网膜组织经过胶原酶适当消化后，产生大量具有良好生长能力的微血管碎片，贴壁后可见大鼠视网膜微内皮细胞自微血管碎片中游出，早期似梭状聚集于微血管碎片的周围，3-7天显克隆生长，12-14天细胞融合显铺路石样单层生长，存在接触性抑制，传代培养时5-6天可融合生长。选择性培养获得的大鼠视网膜微血管内皮细胞纯度高，能连续传代，保持性状不变，对Ⅷ因子相关抗体染色阳性。结论 视网膜剪碎、胶原酶、FBS 、bFGF、培养皿处理及机械除杂法分离，选择性消化和贴壁等应用可获得较纯的大鼠视网膜微血管内皮细胞，方便简单，具有良好的重复性。
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| 会议投稿录入：aya610 责任编辑：毛进 |
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