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| 羊膜载体对人视网膜色素上皮细胞增殖和分化的影响 |
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作者：王瑶 宫华… 文章来源：山东省眼科研究所山东省眼科学重点实验室 266071 点击数：1565 更新时间：2005/6/29 11:21:11 
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| [目的]以羊膜为载体培养人视网膜色素上皮细胞(RPE)，观察羊膜对RPE细胞增殖和分化的影响。
[方法]先将ARPE-19细胞（ATCC，CRL-2302）进行培养、传代，制成单细胞悬液，接种于48孔培养板内，进行培养。每组设4个复孔。实验组在接种前先将羊膜载体（圆形，直径与培养孔直径相同，以覆盖培养孔全部底部面积）铺在培养孔内，再行细胞接种培养；对照组不铺羊膜，直接在培养孔内进行细胞培养。于接种后24h、48 h、72 h、96 h行MTT法检测细胞增殖；或分别于培养后2周、3周收集细胞，提取mRNA，进行RT-PCR检测相关细胞因子或细胞间隙蛋白的表达；培养3周时行透射电镜检查，观察各组RPE细胞的形态变化；部分实验中羊膜载体做成对角线与培养孔直径相等的正方形，仅覆盖培养孔部分表面，通过比较同一培养孔中不同生长表面上的RPE细胞的状态用以分析羊膜是否通过可溶性因子发挥作用。
[结果]增殖实验表明，与接种在培养板内的RPE细胞相比，接种在圆形羊膜载体上的RPE细胞增殖缓慢，MTT法测得的细胞密度友统计学差异（P<0.05）。在铺有方形羊膜片的培养孔中，光镜下可见羊膜上的细胞密度明显低于周围未包被的区域，显示羊膜对RPE细胞增殖的抑制作用是通过局部物理接触作用而非通过可溶性因子。RT-PCR结果表明生长在羊膜上的RPE细胞内与细胞连接相关的多种蛋白（如occludin、claudin 1、ZO-2、N-cadherin、β-catenin、CRALBP、Connexin 43等）或细胞因子PEDF等表达增强，提示羊膜可以促进RPE细胞功能分化。超微结构分析发现植于羊膜上的部分RPE细胞顶部有纤毛生长，提示该部分RPE细胞功能高度分化。
[结论]羊膜组织抑制体外培养的RPE细胞的增殖但可促进和保持RPE细胞的功能分化，是体外培养RPE细胞的良好载体，有助于恢复RPE细胞的功能。
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| 会议投稿录入：aya610 责任编辑：毛进 |
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