目的 对培养的大鼠视杯来源视网膜干细胞(OC-RSCs)在体内微环境内的分化情况及对变性视网膜的修复作用进行研究,阐明OC-RSCs移植后的在体分化特性,证实OC-RSCs在正常Long Evans 大鼠和RCS大鼠视网膜下腔分化为感光细胞的可能性,为OC-RSCs移植修复视网膜变性提供更准确的证据,探讨以OC-RSCs为种子细胞的视网膜移植的可行性。 方法 用EGFP转染OC-RSCs,将转染EGFP的OC-RSCs移植到RCS大鼠和Long Evans大鼠视网膜下腔后,免疫荧光组织化学及苏木素染色方法相结合,激光扫描共聚焦显微镜观察移植后1周、2周、3周、4周EGFP转染细胞在正常Long Evans大鼠及RCS大鼠视网膜下腔的存活、迁徙及视杆细胞标志蛋白rhodopsin的表达情况;检测OC-RSCs RCS大鼠视网膜下腔移植前后及与同龄对照眼的mfERG,并进行统计学分析。 结果 ⑴外源基因EGFP可在OC-RSCs中良好表达;⑵EGFP转染的OC-RSCs视网膜下腔移植后,能在Long Evans大鼠视网膜下腔和感光细胞层的外层内存活,但迁徙现象不明显;而移植入RCS大鼠视网膜下腔的EGFP转染的OC-RSCs能在视网膜感光细胞层内存活和迁徙到视网膜各层;两种动物的移植术眼,都可在视网膜感光细胞层内观察到rhodopsin阳性细胞,在后者视网膜内表达rhodopsin的细胞数量较多;⑶移植四周后RCS大鼠术眼移植区P1波反应密度和幅值较对照组增高,差异有显著意义(P<0.05),而潜伏期无明显变化,N1波幅值与潜伏期和对照眼相比差异无显著意义。 结论 视网膜下腔移植OC-RSCs能在Long Evans大鼠和RCS大鼠视网膜下腔内存活、分化为感光细胞,在RCS大鼠眼内还能向视网膜内层迁徙,提示变性视网膜较健康视网膜更有利于OC-RSCs的迁徙,这可能是移植后宿主视网膜mfERG变化的原因之一,为视网膜变性疾病的治疗提供了新的思路和途径。 |