| 目的：观察常染色体显性视网膜色素变性(autosomal dominant retinitis pigmentosa,ADRP)家系的视紫红质(rhodopsin,RHO)基因突变特征。方法:按国际通用ADRP诊断标准对所收集的宁夏回族地区4个常染色体显性遗传视网膜色素变性家系中的27例成员,抽取外周静脉血3～5ml，EDTA抗凝,采用赛百胜公司生产的试剂盒抽提白细胞DNA,按已发表的RHO基因序列资料(GenBankaccessionno.U49742,K02281),参照Dryja等报道的方法进行PCR引物设计,在设计引物时使其扩增区域覆盖RHO基因的5个外显子及其附近拼接位点中的内含子，并避开文献已报道的RHO基因多态位点，共设计合成了5对引物。聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增RHO基因第1～5外显子基因片断，反应结束后将其产物进行琼脂糖凝胶(1.5%～2.0%)电泳,证实PCR扩增的目的片段（片断大小在165～422bp之间）。应用变性高效液相色谱分析 (denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术对视紫红质基因整个编码区的突变筛选,对DHPLC检测有突变峰的外显子PCR产物进行克隆测序;并随机收集30例正常人进行对照检测。结果：一家系中3例ADRP患者的RHO基因的第297密码子存在杂合的两种类型的密码子(AGC和AGT),其第三个碱基由C变成Ｔ，但未引起编码氨基酸的改变，而该家系的另4名患者及正常成员则未检测到该突变，同时在对照组中也发现一例此类型沉默型突变。并且该家系在第3外显子3′端下游第四个碱基处发生C-T转换，其11个成员中该位点呈T纯合子的1例，8例呈杂合子状态。同时在对准组中发现2例该位点的杂合子状态。结论：视紫红质基因Ser-297-Ser突变不是该ADRP家系的致病原因，系RHO基因的多态现象。而第3外显子3′端下游第四个碱基处发生的C-T转换，其在正常人群及患者中发生频率是否相同，其是否参与RP的发病还有待进一步研究证实。 |
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