本实验通过探讨染料木黄酮对培养的人眼Tenon’s囊成纤维细胞增殖的影响,为染料木黄酮用于青光眼滤过术后抗瘢痕形成的辅助用药的可能性提供理论依据。
【方法】: 取在我院行滤过性手术的青光眼患者的Tenon’s囊筋膜组织,采用组织块培养法进行原代培养及传代培养,用形态学及免疫组化染色法进行鉴定,取第3 ~6代培养的细胞消化接种于96孔板,加入不同浓度6.25μg/ml,12.5μg/ml,25μg/ml,50μg/ml,100μg/ml的染料木黄酮分别作用48小时、72小时后,采用两种不同的方法测定细胞增殖状况: 1. 细胞计数法:在显微镜下用血细胞计数板计数细胞密度,在不同的时间重复实验3次; 2.采用四氮唑盐代谢法(MTT)检测其对细胞增殖的影响。
【结果】:1. 细胞计数法:染料木黄酮对培养的人眼Tenon’s囊成纤维细胞增殖的抑制作用呈现浓度和时间依赖性。染料木黄酮作用48小时后,浓度25μ g/ml以上的各实验组与对照组比较差异有显著性(P<0.05);药物作用72小时后,浓度12.5μg/ml以上实验组与对照组比较差异有显著性(P<0.05) (见表1,图1);2. MTT法:染料木黄酮作用48小时后,浓度25.0μg/ml以上的各实验组与对照组吸光度OD值均数间比较差异有显著性(P<0.05);作用72小时后,浓度12.5μg/ml以上的实验组与对照组比差异有显著性(P<0.05) (见表2,图2)。
【结论】:染料木黄酮剂量、时间依赖地抑制体外培养的人眼Tenon’s囊成纤维细胞的增殖, 本实验初步测量了其浓度范围,推测染料木黄酮有望成为青光眼滤过性手术中抗瘢痕形成的新一代药物。 |