目的:观察家兔玻璃体内注射重组腺伴随病毒介导的绿荧光蛋白基因(adeno-associated virus-green fluorescent protein gene, rAAV-GFP)后视网膜绿荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)的表达,探讨我们课题组构建的rAAV作为眼内基因转染载体的可能性。
方法:36只健康日本大耳白兔随机分为对照组和实验组。对照组家兔随机选取一眼为正常对照,不进行任何处理;另一眼为PBS对照,玻璃体内注射10μl PBS。实验组任选一眼为实验眼,玻璃体内注射10μl rAAV-GFP(病毒滴度为1×1011TU•L-1),对侧眼不观察。分别于注射后3d、7d、14d摘除眼球进行视网膜铺片,荧光显微镜下观察视网膜GFP表达并进行荧光强度分级。三组视网膜GFP表达进行比较。每个观察时间点6只家兔。
结果:正常对照组和PBS对照组家兔视网膜无GFP表达。实验组家兔玻璃体注射rAAV-GFP后第3天视网膜即可见较强的GFP荧光表达。随着观察时间的延长,实验组视网膜GFP荧光表达逐渐增强(P<0.05)。共焦显微镜观察表达的GFP位于细胞浆内。
结论:我们构建的重组腺伴随病毒(adeno-associated virus, rAAV)是一个可靠、简便易行的基因转移载体。绿荧光蛋白基因是一个良好的报告基因。
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