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| 大鼠结膜囊成纤维细胞TGFβ2特异性siRNA的筛选及其载体构建的研究 |
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作者：马建民1 … 文章来源：首都医科大学附属北京同仁医院眼科中心 点击数：816 更新时间：2006/6/21 14:12:12 
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| 目的 筛选大鼠结膜囊成纤维细胞TGFβ2特异性siRNAs，并构建其载体，为今后研究其对大鼠结膜囊成纤维细胞增殖的抑制作用奠定基础。
方法 在Genbank中，查找大鼠TGFβ2 mRNA序列。按照RNAi的设计原则，利用Ambion公司提供的软件，使用Finder程序查找和设计4对正义及反义寡核苷酸链（即 L1，L2，L3，L 4）并使用BLAST软件对其同源性进行检测。采用体外转录法合成4个TGFβ2 siRNAs，分别转染体外培养的大鼠Tenon’s囊成纤维细胞，以未转染细胞作为空白对照，转染后48小时采用RT－PCR技术检测所合成的siRNAs对TGFβ2 mRNA表达的干扰作用；在此基础上，采用pSilencer™ 3.1-H1 质粒作为载体，构建有干扰作用siRNA的特异性载体，并采用酶切和测序法对构建载体的正确性进行检验。
结果 转染后48小时，L1，L2，L3，L 4 4条链与空白对照组相比，有一条TGFβ2 siRNA链（L 4）能够使大鼠Tenon’s囊成纤维细胞TGFβ2的mRNA表达水平明显下调，其余3条TGFβ2 siRNAs链未产生明显的干扰效果。经过酶切和测序检测证明成功构建了有干扰效果TGFβ2 siRNA的载体。
结论 不同的TGFβ2 siRNA对大鼠Tenon’s囊成纤维细胞TGFβ2mRNA表达具有不同的干扰效能；能够构建有干扰效能的TGFβ2 siRNA特异性载体。
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| 会议投稿录入：aya610 责任编辑：毛进 |
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