目的:构建携带PEDF基因的重组腺病毒,为进一步基因治疗CNV奠定基础。
方法:RT-PCR扩增PEDF基因cDNA,将PEDF克隆入腺病毒表达载体质粒pDC316中并测序鉴定。利用腺病毒Admax系统,通过含有目的基因片段PEDF的穿梭载体pDC316/PEDF和病毒骨架质粒共转染293细胞的方法包装出重组腺病毒AdPEDF。利用PCR, Western Blot等方法对重组腺病毒进行鉴定。氯化铯密度梯度离心法纯化以得到高滴度的腺病毒。
结果:获得了表达PEDF的重组腺病毒。
结论:成功构建出携带PEDF基因的重组腺病毒,为更深入的基因治疗研究奠定了基础。
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