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| 人眼脉络膜血管内皮细胞的生长曲线测定 |
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作者：张明 张军… 文章来源：四川大学华西眼科中心 610041 点击数： 更新时间：2004-6-15 
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| 目的：探讨人眼脉络膜血管内皮细胞体外生长情况，为进行人眼脉络膜血管内皮细胞体外实验选择合适的时机提供依据；方法：1. 采用胰酶、胶原酶对人眼脉络膜组织块进行两步消化，应用免疫磁珠CD31Dynabeads对消化后的细胞混合悬液分选纯化，合理地使用适宜于血管内皮细胞生长的培养基和培养器皿，培养人眼脉络膜血管内皮细胞；形态学观察、透射电子显微镜观察、内皮细胞特异标志FⅧ因子、CD31、CD34的免疫组化染色观察的方法对培养的人眼脉络膜血管内皮细胞进行了鉴定；2.MTT法测定人眼脉络膜血管内皮细胞的生长曲线：将传代培养至第3代的人眼脉络膜血管内皮细胞接种于96孔培养板中，接种密度为2.5×103/孔，每天收集3孔的细胞和3孔的空白对照（不含细胞的PBS）进行MTT法测细胞的活力。具体方法为：当细胞培养至所选定的时间时，每孔加入灭菌的PBS液配制的5mg/mlMTT溶液20μl，在细胞培养箱内孵育4h后，终止培养，小心吸出上清液，每孔加DMSO150μl，振荡10min，使紫色结晶彻底溶解。在酶标仪上测定492nm处的吸光度（A）值〔旧称光密度值（OD）〕，吸光度值的大小反映内皮细胞成活数量及活性。以时间为横坐标（天），减去空白对照的吸光度（A）值为纵坐标绘制生长曲线图。；结果：1.人眼脉络膜血管内皮细胞具有典型的血管内皮细胞的体外培养形态学特征，同时胞浆内存在Weibel-Palade小体，并有FⅧ因子、CD31、CD34的表达；2.MTT比色法所测的人眼脉络膜血管内皮细胞生长曲线显示。在传代后第一天细胞活性稍减少，经过2～3天的潜伏期后进入对数生长期，约在第5天进入平台期并持续至第8天，到第9天细胞出现生长抑制。结论：体外培养的人眼脉络膜血管内皮细胞在合适的条件下发生细胞增殖，但是增殖能力是有限的。在对人眼脉络膜血管内皮细胞进行体外实验研究应掌握合适的时机。 |
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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