目的 观察结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)对视网膜色素上皮(RPE)细胞合成胞外基质(ECM)的影响。方法 采用3H-脯氨酸掺入实验和RT-PCR方法观察重组人CTGF因子(rhCTGF)对培养人RPE细胞合成ECM的影响,并观察了8-溴-cAMP对CTGF诱导胶原蛋白合成的影响以及瞬时转染CTGF反义寡核苷酸(ASODN)对TGF-β1促进胶原合成的影响。 结果 rhCTGF剂量依赖性地刺激RPE细胞3H-脯氨酸掺入值增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。8-Br-cAMP和rhCTGF联合作用,可以抑制rhCTGF刺激的RPE细胞胶原蛋白的合成,掺入抑制率为42.58%;但8-Br- cAMP对RPE细胞的基础胶原蛋白的合成无明显影响。RPE细胞瞬时转染CTGF反义寡核苷酸后,可以阻断TGF-β1 诱导的胶原蛋白的合成,掺入抑制率为27.55%。转染CTGF正义寡核苷酸组3H-脯氨酸的掺入值与对照组无显著性差异(P>0.05)。RT-PCR分析CTGF剂量依赖性上调FN、Ⅲ型胶原mRNA表达,60ng/mLCTGF分别使其上调1.93倍和2.98倍;CTGF在三个浓度组均能上调MMP-2和TIMP-2 mRNA的表达,15ng/mL和30ng/mLCTGF对MMP-2 mRNA表达的上调量为1.67倍和2.61倍,大于同一剂量的TIMP-2 mRNA的上调量(1.30倍和1.92倍),60ng/mLCTGF对MMP-2的表达量为2.36倍,低于诱导TIMP-2的作用(2.62倍)。TGF-β1 对FN、Ⅲ型胶原mRNA的表达上调量分别为对照组的1.65倍和1.79倍,而瞬时转染CTGF反义寡核苷酸可以部分阻断TGF-β1 诱导的FN、Ⅲ型胶原mRNA的表达。结论 PVR病理过程中,CTGF参与调节RPE细胞ECM的合成和降解,在RPE细胞创伤修复过程和PVR等眼内增生性疾病中有重要意义。8-Br-cAMP和CTGF反义寡核苷酸对PVR等的防治可能有一定作用。 |