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| 早期晶状体氨基甲酰化靶蛋白的鉴定 |
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作者：严 宏，郭… 文章来源：第四军医大学唐都医院眼科 710038 点击数：1709 更新时间：2004/5/28 
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| 目的：氨基甲酰化是一种重要的翻译后修饰，是年龄相关性白内障形成的因素之一，多发生于肾功衰竭和重症腹泻。本研究拟在生理条件下鉴定早期晶状体中氨基甲酰化的靶蛋白。
方法：新鲜的完整的牛晶体与14C标记的氰酸钾孵育1w；用S-300HR凝胶柱层析分离晶体皮质和核水溶性蛋白；将放射性高的部分混合并冷冻干燥，加载于Affi Blue柱分离酶类；并采用亲和层析柱直接分离晶状体核水溶性蛋白；通过SDS-PAGE和质谱分析氰酸盐-14C标记的放射性最高的部分。
结果：氰酸钾14C标记的蛋白质混合物中主要的成分是水溶性的，在晶状体皮质中的含量高于晶体核。凝胶层析的结果证明14C-氨基甲酰化的晶体蛋白是：皮质中的α-和β-晶体蛋白，核中的β-和γ-晶体蛋白。SDS-PAGE表明Affi-Gel Blue分离后，皮质中被14C-氨基甲酰化结合的有20KDa和35KDa的两个亚基，而核中被14C-氨基甲酰化结合的与非结合的晶体蛋白没有明显区别，主要由20KDa的蛋白构成。质谱分析结果表明皮质中放射性高的物质主要是αA-和αB-晶体蛋白及ζ-晶体蛋白，晶状体核为βA1和αB-晶体蛋白及少量的γB-晶体蛋白，晶体核中氨基甲酰化发生于αB-晶体蛋白的赖氨酸92和103位。
结论：晶状体皮质的α-和ζ-晶体蛋白，晶状体核的βA1 -和γB-晶体蛋白是首要氨基甲酰化的靶蛋白。ζ-晶体蛋白的化学修饰起到类似于NADPH（一种氧化还原酶类的醌）的作用，它能降低催化酶的能力并影响了晶体的新陈代谢，进一步促进了白内障的发展。
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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