| 目的 比较在体外有或无bFGF培养条件下，人胚胎视网膜神经干细胞增殖与分化的变化。方法 分离14周人胚胎眼球神经视网膜获得视网膜神经干细胞，分别置于含有N2添加剂有或无bFGF的DMEM/F12培养基中培养。培养5天及84天分别行免疫荧光染色检测神经干细胞特异性标志nestin、视网膜干细胞标志Pax6及成熟神经元标志Map2、胶质纤维酸性蛋白GFAP等抗原表达；原代培养第9天电镜观察两种培养基中视网膜神经干细胞的超微结构变化；同步流式细胞仪DNA染色法检测视网膜神经干细胞分别处于不同细胞周期的细胞百分比。结果 视网膜神经干细胞能够在含有N2添加剂有或无bFGF的DMEM/F12培养基中悬浮生长，并能形成表达nestin及Pax6神经球样结构。具有体外扩增传代及分化为神经元和神经胶质样细胞的能力。在无bFGF培养基中，视网膜神经干细胞能够长时间维持未分化状态，电镜观察显示其具有大细胞核、常染色质较含有bFGF培养之神经干细胞更丰富等幼稚细胞特性。流式细胞仪DNA染色法显示无bFGF培养的视网膜神经干细胞G0/G1期占93.42%,G2/M期占5.71%,S期占0.87%；含bFGF培养的视网膜神经干细胞G0/G1期占98.16%,G2/M期占1.84%,S期占0.00%。无bFGF培养的视网膜神经干细胞G2/M期所占比例较大，表明细胞增殖分裂能力较旺盛。结论 人胚胎视网膜神经干细胞能够在含有N2添加剂有或无bFGF的DMEM/F12培养基中生长、扩增传代、分化为神经元和神经胶质样细胞的能力。在无bFGF培养条件下，人胚胎视网膜神经干细胞显示更加幼稚的细胞特性且具有较旺盛的细胞分裂增殖能力。 |
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