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| 大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因系统抑制体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的研究 |
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作者：王继兵 … 文章来源：南方医科大学惠州协和医院眼科 516006 广东省惠州市仲恺二路88号 点击数：1194 更新时间：2007/5/5 18:49:58 
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| 目的 观察大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因(E.coli.CD)系统对人眼球筋膜囊成纤维细胞（HTFs）增殖抑制作用。方法 构建含CD基因的逆转录病毒载体pL(cd)SN并转入包装细胞系PT67进行病毒包装，G418筛选抗性克隆并扩大培养收集病毒上清，测定病毒滴度。透射电镜鉴定病毒颗粒；PCR鉴定CD基因在病毒基因组中的整合。病毒感染HTFs细胞，G418筛选并扩大培养，RT-PCR检测CD基因的表达；加不同浓度前药5-氟胞嘧啶（5-FC）后，MTT法检测CD基因对HTFs细胞的增殖抑制作用及旁观者效应。结果 酶切鉴定结果显示成功构建了逆转录病毒载体pL(cd)SN，电镜下包装细胞产生的病毒颗粒呈椭圆形、直径约100nm；病毒基因组中，PCR扩增出了CD基因；测得病毒滴度为8×106 cfu/ml；，RT-PCR检测到被转染HTFs细胞中CD基因mRNA表达；CD/5-FC系统对HTFs细胞的增殖抑制作用表现为剂量依赖性，1500µg/ml作用5天细胞几乎全部死亡，IC50为400µg/ml，并观察到旁观者效应，转基因细胞占40％时，可使近50％的未转基因细胞杀死。结论 E.coli.CD基因系统能有效抑制体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖，此系统只作用增殖分裂细胞，作用具有靶向性。 |
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| 会议投稿录入：wangjb 责任编辑：毛进 |
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