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| 发卡样CD105特异性RNA干扰重组体的构建及筛选 |
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作者：屈超义 唐… 文章来源：中南大学湘雅二医院 410011 点击数：1216 更新时间：2007/5/18 11:46:16 
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| 目的：利用Pgenesil-1质粒载体构建介导CD105(Endoglin)短发夹RNA表达的质粒，并筛选有效的抑制序列。方法：分别设计4对有小发夹结构的两条DNA序列及1对非特异对照序列，经退火成互补双链，再克隆至带有U6启动子的质粒载体Pgenesil-1中，构建重组体，转化DH5a菌株，提取质粒行酶切鉴定后，进行测序分析。将构建成功的4组重组体转染激光诱导的BN大鼠脉络膜新生血管模型2w后，通过半定量RT-PCR分析CD105mRNA的表达水平，与空白对照及仅加转染试剂组比较分析。结果：CD105的shR
NA片段被成功克隆到Pgenesil-1质粒载体中，经酶切与测序证实构建成功，转染激光诱导的BN大鼠脉络膜新生血管模型2w后，与空白对照组相比，通过半定量RT-PCR分析发现有两组细胞CD105 mRNA水平明显下降，抑制效率分别为52±3％，(P<0.05)；78±5％，(P<0.05)；34±3％, (P<0.05)；25±4％, (P<0.05)。转染非特异shRNA组及仅加转染试剂组CD105mRNA表达水平无明显变化。结论：成功构建了能表达CD105shRNA的4组重组体，并筛选出能高效抑制CTGF表达的shRNA序列，为进一步探索脉络膜新生血管的发生机制及基因治疗的新途径奠定了实验基础。
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| 会议投稿录入：qcy72 责任编辑：毛进 |
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