| 目的：研究HIV-1 gp120对体内视网膜屏障功能和体外RPE细胞株D407紧密连接的影响。研究方法：大鼠玻璃体注射HIV-1 gp120，24小时后荧光显微镜下观察视网膜体内伊文思蓝染料渗漏的变化。gp120处理培养D407细胞，分不同浓度组( 0.001, 0.01,0.1μg/ml gp120处理细胞48小时)和不同处理时间组（0.1μg/ml gp120处理细胞24，48,72小时）。观察经上皮细胞电阻（Transepithelial electrical resistance, TER）和FITC-白蛋白的单层细胞通透率（Pa%）的变化。透射电镜观察细胞间紧密连接在超微结构水平的改变。使用免疫细胞化学方法和共焦激光显微镜观察其对三种紧密连接蛋白（ZO-1，Occludin，Claudin-1）在D407细胞的表达的影响，Western Blot法检测蛋白表达水平的变化。结果： gp120导致大鼠视网膜血管破坏，染料渗漏。D407细胞电阻抗（TER）降低，渗透率（Pa%）增加，具有时间、剂量依赖性。在gp120由低到高的不同浓度组，TER（Ω）测得值分别为：83.66±2.06, 80.33±1.53, 72.33±0.57, 57.33±5.03；Pa（%）分别为：12.03±1.21，23.06±6.32，39.41±1.13，45.02±1.23。在不同时间处理组，TER（Ω）测得值分别为：81.50±0.70, 74.50±3.53, 59.50±2.12, 56.50±0.70，Pa（%）分别为： 12.90±5.21，24.03±6.21，31.21±6.91，39.4±1.12。（P<0.05）。gp120处理后细胞间紧密连接数量较对照组减少。三种紧密连接蛋白（ZO-1，Occludin，Claudin-1）在D407细胞均有阳性表达。gp120下调细胞ZO-1和Claudin-1蛋白水平表达，对Claudin-1的影响更为显著，具有时间和剂量依赖性。对Occludin没有观察到明显的抑制效应。结论：HIV-1导致体内视网膜血管渗漏，RPE细胞间紧密连接破坏，细胞跨上皮电阻下降，对白蛋白通透率增加，主要下调紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-1。HIV-1对血-视网膜屏障的破坏可能通过包膜蛋白gp120对细胞间紧密连接的破坏实现。 |
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