| 目的：观察HIV-1包膜蛋白gp120对体外培养的RPE细胞株D407氧化应激水平的影响。方法：使用HIV-1 gp120处理细胞，分不同浓度组( 0.001, 0.01,0.1μg/ml gp120处理细胞48小时)和不同处理时间组（0.1μg/ml gp120处理细胞24，48,72小时）。检测细胞一氧化氮（NO），丙二醛（MDA）和总抗氧能力（T-AOC）水平的变化。使用免疫细胞化学方法和共焦激光显微镜观察诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在细胞表达的变化。SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR法检测iNOS在mRNA转录水平的变化。Western Blot法检测iNOS和SOD-Mn在蛋白质表达水平的影响。结果： gp120导致D407细胞T-AOC降低，NO和MDA增加，具有时间、剂量依赖性。gp120诱导细胞iNOS在胞浆、胞核及胞膜均有阳性表达。 iNOS mRNA表达量的增加具有剂量依赖性。在gp120由低到高的不同浓度处理组，每一百万个看家基因（β-actin）校正iNOS mRNA的相对含量分别为11366.85±176.74,23004.53±18030.96,60180.11±10187.41,173143±67227.19，差异具显著性（P<0.05）。 Western Blot结果显示，gp120诱导D407细胞iNOS和SOD-Mn自第48小时起蛋白水平表达水平明显增加，具有时间、剂量依赖性，结论： HIV-1包膜蛋白Gp120导致D407细胞氧化应激，自由基生成增多，上调iNOS及SOD-Mn表达水平。Gp120所致视网膜细胞氧化损伤可能在HIV-1对血-视网膜屏障的破坏机制中具有重要作用。 |
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