| 目的：将兔视网膜色素上皮(RPE)细胞进行体外培养,探讨RPE培养、纯化与鉴定方法,为研究其生理功能、生化特征和病理过程提供细胞来源。
方法：取7-14天比利时黑兔，雌雄不限，给予过量利多卡因行安乐死后无菌条件下取出眼球，1000u庆大盐水4º浸泡30分钟后D-Hank’s液中4º放置3个小时，在解剖显微镜下剪除眼前节及玻璃体，将已脱出的视网膜神经上皮层用纤维剪在视神经处剪除，将后段眼杯放入小胶皮盖中眼杯内加入0.25%胰酶约2/3眼杯，放入37º孵箱中30分钟，加应用液终止消化，轻轻吹打RPE细胞使其脱落用滤网过滤掉杂质1000r/min，5分钟离心，重悬，计数，接瓶。加入含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养。原代细胞72小时换液。一周换两次液，当细胞达到80%融合时用0.25%胰酶加0.01%EDTA进行消化、传代。取第二代细胞爬片进行细胞角蛋白免疫组织化学鉴定。
结果：倒置相差显微镜下观察，刚接种的细胞呈圆形，24-48小时后大部分细胞贴壁生长，呈不规则多边形，贴壁细胞可见清晰透明的细胞核，胞质内布满黑色素颗粒，约2-3周细胞融合。传代细胞生长活跃，3-5天细胞融合。随着传代色素逐渐变淡，4代后色素消失，细胞形态呈不规则形及梭形。随着传代不适宜生长的细胞如脉络膜黑色素细胞逐渐死掉，细胞较纯。免疫细胞化学染色显示RPE细胞胞浆内角蛋白阳性，证实为RPE细胞。
结论：培养出大量视网膜色素上皮细胞可用于体外实验研究。
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