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地塞米松对人眼小梁细胞连接蛋白表达和细胞骨架的影响研究         
地塞米松对人眼小梁细胞连接蛋白表达和细胞骨架的影响研究
作者:卓业鸿 侯… 文章来源:中山大学中山眼科中心,眼科学国家重点实验室,广州 510060 点击数:1190 更新时间:2007/6/11 17:19:52
目 的 探讨地塞米松(Dex)对体外培养正常人及POAG患者人眼小梁细胞紧密连接蛋白ZO-1和间隙连接蛋白Cx43表达的变化及Actin骨架形态结构的影响,初步证实其在小梁网房水流出阻力调节中的作用。 方 法 将体外培养的正常人眼小梁细胞(NTM)、POAG患者小梁细胞(GTM)及永生化正常人眼小梁细胞株(iHTM,加拿大Vincent Raymond教授惠赠)分为对照组和处理组,分别用空白Dex和0.1μM Dex DMEM/F12完全培养液进行培养1-7天,应用免疫荧光细胞化学,RT-PCR、Western blot方法分别从mRNA水平和蛋白水平检测小梁细胞ZO-1、Cx43的表达改变;同时分别用空白Dex和0.5μM Dex DMEM/F12完全培养液进行培养1周,应用免疫荧光细胞化学检测小梁细胞Actin骨架形态的改变。 结 果 ① Dex处理2天后,人眼小梁细胞ZO-1、Cx43蛋白分布无明显变化,均定位于相邻细胞边界。 ② 各组小梁细胞在mRNA水平均有ZO-1、Cx43的表达,其中ZO-1存在两种亚型α+ /α-, ZO-1α+比α-表达量少。 ③ 各组小梁细胞在蛋白水平均有ZO-1、Cx43表达,其中正常人眼小梁细胞只检测到ZO-1一种亚型α-表达而POAG患者小梁细胞检测到ZO-1两种亚型α+ /α-。 Dex处理1-7天,各组细胞两种蛋白的表达均呈先上升后下降的趋势,并且两种蛋白表达趋势变化基本一致。对于正常人眼小梁细胞,Dex处理5天前,相同时间点Dex处理组两种蛋白的表达量明显较对照组高;Dex处理5天后,相同时间点Dex处理组两种蛋白的表达量明显较对照组明显减少。对于POAG患者小梁细胞Dex处理1-7天,相同时间点地塞米松处理组ZO-1a+ 和Cx43蛋白的表达量明显较对照组高。 ④ NTM细胞的DEX处理组可见CLANs结构形成而对照组未见此结构存在;GTM和iHTM细胞对照组可见CLANs结构,而DEX处理组CLANs结构形成明显增多。 结 论 ① 体外培养正常人和POAG患者小梁细胞存在紧密连接相关蛋白ZO-1和间隙连接蛋白Cx43的表达,ZO-1存在两种亚型ZO-1α+与ZO-1α-,其中ZO-1α+在GTM的表达可能与POAG患者小梁网部位房水流出阻力增加有关。 ② Dex可以诱导体外培养人眼小梁细胞Actin骨架重构形成CLANs结构,DEX可以改变紧密连接相关蛋白ZO-1和间隙连接蛋白Cx43的表达,可能在小梁网部位房水流出阻力调节中具有重要作用。
会议投稿录入:aya610    责任编辑:毛进 
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