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FK506对大鼠实验性糖尿病早期视网膜血管白细胞黏附的影响 |
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作者:高艺 … 文章来源:中山大学中山眼科中心 510060 点击数:937 更新时间:2004/6/2
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目的:探讨免疫抑制剂FK506对实验性糖尿病早期视网膜血管内白细胞黏附的影响。
方法:(一)成年Wistar大鼠,STZ腹腔注射诱导糖尿病,成模后第8天随机分3组处理:A. 正常组:不做处理;B.糖尿病+BSS:糖尿病鼠玻璃体腔注射空白溶液5μl;C. 糖尿病+FK506 2.50ng:糖尿病鼠玻璃体腔注射FK506 500ng/ml 5μl。ConA是一种植物血凝素,可用来标记白细胞和血管内皮细胞,清晰地显示血管轮廓。术后24h行FITC-ConA静脉灌注标记视网膜血管内黏附的白细胞,摘除眼球制备全视网膜平铺片,用激发光为490nm波长的滤光片在荧光显微镜下观察并计数视网膜铺片上荧光素标记的细胞。将已记数的视网膜再用免疫荧光组织化学技术检测黏附细胞是否是CD45(白细胞共有抗原)阳性细胞。(二)动物分组,糖尿病诱导及手术方法同前。术后24h摘除眼球取视网膜,制备组织匀浆,提取总蛋白。经Western blot方法半定量分析视网膜内ICAM-1的含量。
结果:(一)荧光显微镜下可见正常大鼠视盘和视网膜血管网络显示清晰,血管内散在极少量的圆形和椭圆形荧光素标记细胞。ConA/CD45双标检测,证实ConA标记的视网膜血管黏附细胞即为CD45阳性细胞。糖尿病8天大鼠的视网膜血管内黏附的白细胞明显增多,是正常组的3.27倍(P<0.001)。FK506能够抑制糖尿病大鼠视网膜血管内白细胞的黏附,可降低43.03%( P<0.001)。(二)糖尿病8天大鼠视网膜内ICAM-1表达增多,是正常组的3.80倍(P<0.05)。 FK506可抑制糖尿病大鼠视网膜内ICAM-1的表达,抑制率达74.27%( P<0.01)。
结论:糖尿病8天大鼠视网膜血管内黏附的白细胞增多,是糖尿病视网膜病变的早期征象之一,经WB法半定量分析表明糖尿病视网膜内ICAM-1的表达升高,玻璃体腔注射FK506可抑制ICAM-1的表达,降低糖尿病视网膜血管内白细胞的黏附。
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会议投稿录入:毛进 责任编辑:毛进 |
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