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胎儿视网膜祖细胞的分离培养         
胎儿视网膜祖细胞的分离培养
作者:高玲 胡蓉… 文章来源:中南大学湘雅二医院眼科 410011 点击数:1144 更新时间:2004/6/2
目的:建立胎儿视网膜祖细胞体外培养体系。方法:取胎龄70~100天人工流产胎儿眼球,在体式镜下小心分离出视网膜神经上皮。以酶加机械吹打将所得视网膜神经上皮消化分离成单细胞,接种于预先以多聚鸟氨酸包被或未包被的培养皿中。预先包被培养皿中贴壁培养的细胞每48小时换液,于细胞接近融合时以胰酶消化传代:未包被培养皿中悬浮培养的细胞球每48小时半量换液,于细胞球直径约100~200μm大小时以胰酶加机械吹打法消化成单细胞后传代,传代后均依照原培养方法培养。通过Brd-u的掺入,并运用免疫荧光技术对细胞成分进行鉴定。结果:分离获得的细胞大部分表达神经干细胞及祖细胞标志蛋白Nestin;在两种培养条件下原代培养的细胞均可形成集落,具有增殖能力;悬浮培养的细胞球呈正球形,形态类似神经球,但传代后未见神经球样形态的细胞球出现;贴壁培养的细胞部分呈多角形、胞体大,其间可见胞体小而核相对大的圆形细胞,传代后多角形细胞增多。结论:从胎龄70~100天胎儿视网膜神经上皮中初步获得原代培养的视网膜祖细胞,为胎儿视网膜祖细胞的体外培养体系的建立打下基础。
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