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虹膜色素上皮细胞的体外培养、冻存及复苏         
虹膜色素上皮细胞的体外培养、冻存及复苏
作者:高维奇 文章来源:哈尔滨医科大学第一临床医学院附属眼科医院 150001 点击数:1540 更新时间:2004/6/3
目的:观察体外培养的兔眼虹膜色素上皮细胞(iris pigment epithelium,IPE)的生长状况,为进一步研究及移植IPE细胞提供实验基础。 方法:采用酶消化加显微分离法,分离IPE细胞,对其进行培养、传代、冻存和复苏。用透射电镜、细胞免疫化学法鉴定细胞性质。 结果: 刚分离出来的原代虹膜色素上皮细胞(IPE)呈黑色圆球形,大多数细胞成单细胞状态,有的呈2-3个细胞的细胞团。经3-5日开始贴壁,此期可见圆球形贴壁细胞与半贴壁细胞和悬浮细胞共存于培养瓶中。细胞进一步延展,形成纺棰状或三角形,黑色素颗粒聚集于核周围,胞体可伸出类似伪足样的结构,向周围进一步扩展。约 5.25±1.74天后,大约 70%的IPE 细胞开始出现分裂增殖,在镜下,有的表现为胞体增大,细胞内出现双核,有时可见分裂相,而更多细胞则仅表现为色素颗粒的减少。传代后的细胞起初呈片状延展相互接触后,延长成纺棰形或多角形。复苏后的IPE细胞呈圆球状,散在均匀分布于培养液中,约1-3日贴壁开始生长,倒置显微镜下,细胞的形态与冻存前无差异;复苏后的细胞生长良好,并可进行传代培养。 结论:本课题在体外应用细胞培养技术,成功地培养了虹膜色素上皮(IPE)细胞 并传代培养3月余,经免疫组织化学染色证实,所培养细胞为纯IPE 细胞;同时对所培养细胞进行冻存及复苏,复苏后的细胞亦生长良好。
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