| 目的：观察川芎嗪对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的抑制作用及其对人视网膜微血管内皮细胞二维血管样结构形成的影响。
方法：用本课题组已建立的方法分离、培养、鉴定人视网膜微血管内皮细胞。将基质胶(9.5mg/ml)以20ul/孔的量包被12孔板，37 oC 孵育30min，包被后在每孔中加入约5×104个内皮细胞。将细胞分成4组，分别用纯无血清内皮培养基（组1）和混有川芎嗪的无血清培养基（组2，100ug/ml；组3，200ug/ml；组4，400ug/ml）处理各组。1，6，10，18，24，48小时后，照相记录细胞变化情况。将48只种蛋随机分成4组，孵化条件为37 oC，湿度保持在55%左右。孵育至第9天，在蛋壳上开一小窗，暴露绒毛尿囊膜，保持鸡胚活力及卵黄膜的完整性。将生理盐水（组1）或不同剂量的川芎嗪（组2，2.5ug/环；组3，5ug/环；组4，10ug/环）与1%羟丙基甲基纤维素制成混合物备用。将可的松预处理的滤纸环（? 7mm，? 5mm）小心置于绒毛尿囊膜上相对无血管区，然后将备好的混合物局部敷加在环内，每个环加液总量10ul。封上窗口继续孵育。至第13天，将绒毛尿囊膜和滤纸环共同固定、收获，并照相记录。通过计数滤纸环内血管分叉数来评价血管密度。
结果：在二维血管生成实验中，各组内皮细胞在1-2小时内开始伸长、扭曲变形。6小时后，组1细胞束形成大量树枝样网状结构并相互吻合。至18-24小时，这种相互连接的网状结构（二维血管网样）完全形成。并在24-48小时逐渐塌陷并脱离培养皿。以上观察到的结果在组2，3，4受到抑制和延迟，尤其以组4最为明显。组4的二维血管样结构在36-48小时以后才会完全形成。在鸡胚绒毛尿囊膜实验中，各组平均血管分叉数为157.4±27.7(组1), 99.6±34.6(组4), 110.6±55.3(组3), 144.8±20.1(组2)。高剂量组（组3、4）的平均血管密度较生理盐水组低(P<0.05)，低剂量组（组2）与生理盐水组的血管密度差别没有意义（P=0.28）。组3、4之间也无差别。
结论：川芎嗪能抑制人视网膜微血管内皮细胞在基质胶形成二维血管样结构，并能部分抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管生成，但抑制作用是否存在剂量依赖关系需要进一步研究。川芎嗪在体内外具有潜在的抑制新生血管生成的作用。 |
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