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| 腺病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染器官培养法保存兔角膜内皮细胞的研究 |
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作者：魏捷 蒋华… 文章来源：济南军区总医院 济南军区眼科中心 济南 250031 点击数：451 更新时间：2011/5/13 11:58:00 
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| 目的 免疫排斥反应一直是导致角膜移植手术失败的重要原因。预先以目的基因转染保存后植片可能会给控制排斥反应发生，进而阻止角膜内皮细胞（corneal endothelial cells，CEC）损失带来希望。本研究目的即是探索腺病毒载体对器官培养法保存的兔角膜片上CEC的转染效率，以报告基因增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）的荧光表达检测腺病毒的转染效率和动态过程。方法 ECM+2%FBS器官培养液中保存2~3周的去上皮兔角膜片与编码EGFP的复制缺陷型腺病毒载体Ad5（5×106～5×109vp/uL）37℃下共同孵育，转染后继续31℃下培养2周。剥离大部分基质后荧光显微镜下观察不同时间点EGFP在植片CEC中的表达强度，比较不同浓度腺病毒载体的转染效率。台盘蓝－茜素红活性计数转染后角膜内皮细胞密度（endothelial cells density，ECD）。结果 在有效浓度范围内，转染后报告基因EGFP的荧光在兔角膜内皮层有强烈表达。5×106~5×109vp/μL Ad5 转染组中EGFP 在CEC中的表达面积为4～94％，表达相对强度为8～87。过高浓度的AdV（5×109vp/μL）使ECD值降低至1978±281 个/mm2。在2周的常温延续培养期间，EGFP在离体角膜内皮层中的荧光表达持续存在，强度逐渐降低。结论 器官培养法保存的角膜内皮细胞可以被腺病毒载体高效率、特异性地转染成功并持续表达，转染效率略低于新鲜角膜片。EGFP可以成为监测这一转染过程的理想标记物。 |
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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