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大鼠尾芽胚视杯视网膜干细胞的分离培养与鉴定         
大鼠尾芽胚视杯视网膜干细胞的分离培养与鉴定
作者:黄小勇  … 文章来源:第三军医大学西南眼科医院 400038重庆 点击数:902 更新时间:2004/6/10
目的 大鼠尾芽胚视杯视网膜干细胞的分离、体外培养和鉴定研究。  方法 获取LongEven大鼠尾芽胚胚胎,分离视杯获得单细胞悬液进行体外无血清培养,利用单细胞克隆技术分离具有单细胞克隆能力的细胞群,选取单个克隆进行连续传代培养获得大量亚克隆,并进行有血清条件下体外诱导和模拟体内环境诱导的观察,采用免疫荧光细胞化学技术检测Chx-10和分化后视网膜各种类型特异性标记的表达。  结果 从尾芽胚视杯中成功地分离出视网膜干细胞,该细胞群具有连续克隆能力,表达Nestin和Chx-10(视网膜干细胞标记),在体外诱导的条件下,可表达视网膜终末细胞标记PKC(双极细胞标记)、GFAP(Müller细胞标记)、Thy1(神经节细胞标记),少数细胞表达Nestin和MAP2,在模拟体内环境诱导后,则不仅表达上述细胞标记,而且Rhodopsin(视杆细胞标记)和Syntaxin(无长突细胞标记)表达阳性。  结论 从大鼠尾芽胚视杯中分离的细胞具有自我更新能力和多分化潜能,表达视网膜干细胞标记,有很强的增殖能力。是视网膜的干细胞。 [国家自然科学基金资助项目(30270457)]
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