目的 视网膜色素上皮细胞(RPE)发生上皮细胞-间充质细胞转换(EMT)对增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的启动和发展具有重要作用。在一些肿瘤及纤维化疾病中,Snail转录因子是调控EMT的关键因素。本研究调查Snail调控下的RPE细胞-间充质细胞转换在PVR病理过程中的作用。
方法 研究采用人RPE细胞系ARPE-19细胞。应用相差显微镜观察TGF-β1作用下ARPE-19细胞的形态变化。实时荧光定量PCR和免疫印迹技术检测TGF-β1作用6h,12h,24h,48h,72h后,ARPE-19细胞中Snail基因及上皮细胞标志物(E钙粘素,闭锁小带)和间充质细胞标志物(纤维粘连蛋白,α-肌动蛋白)表达的变化。RNAi技术沉默Snail基因。免疫荧光技术观察PVR患者视网膜前膜样本中Snail表达情况。数据采用均数±标准差表示,统计学处理应用单因素方差分析。
结果 10ng/ml TGF-β1作用ARPE-19细胞成功诱导了RPE-间充质细胞转换:1、ARPE-19细胞由鹅卵石样上皮细胞形态逐渐转变为纺锤形的成纤维细胞样形态;2、TGF-β1作用6h即检测到间质细胞标志物纤粘连蛋白和α-肌动蛋白表达上调,并持续增强至72h;3、上皮细胞标志物E-钙粘素和闭锁小带-1表达显著下调,至72h时表达基本消失。Snail基因表达随着TGF-β1作用时间的延长而明显增强。沉默Snail基因取消了TGF-β1诱导的RPE-间充质细胞转换。Snail蛋白在视网膜前膜样本中呈阳性表达,且主要分布于细胞核。
结论 Snail转录因子参与并调控PVR病程中RPE-间充质细胞转换,靶向干预Snail基因可能为将来预防和治疗PVR提供新的策略。 |