目的 探讨经慢病毒载体（pLenti6/V5-DEST）介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰的人羊膜上皮细胞做为组织工程化角膜表层一种新的细胞来源的应用价值。
方法 利用慢病毒载体（pLenti6/V5-DEST）携带标记基因增强型绿色荧光蛋白转染人羊膜上皮细胞，荧光显微镜下观察转染基因的瞬时表达,倒置显微镜下观察转染细胞的生长形态,流式细胞仪检测转染细胞增强型绿色荧光蛋白阳性表达率，然后应用EGFP基因修饰的人羊膜上皮细胞构建复层上皮细胞-角膜基质移植材料。将角膜缘干细胞缺乏的兔眼分为两组，实验组兔眼移植增强型绿色荧光蛋白基因修饰的人羊膜上皮细胞构建的复层上皮细胞-角膜基质移植材料，空白对照组兔眼移植无上皮细胞的角膜基质移植材料，每天观察两组兔眼的混浊度、结膜上皮化和新生血管化情况。一月后处死动物取下眼球，荧光显微镜下观察角膜组织片中绿色荧光的表达，及免疫组化检测其细胞角蛋白CK8、CK18、CK12的表达。
结果 大多数转染细胞筛选出的抗性克隆以及培养的克隆细胞均与正常体外培养的人羊膜上皮细胞在形态上无显著差异，流式细胞仪检测显示瞬时转染48h的人羊膜上皮细胞中增强型绿色荧光蛋白阳性表达率最高，为61.5%；实验组10只兔眼中有6只兔眼角膜恢复透明，组织片在荧光显微镜下观察能发出绿色荧光，免疫组化结果显示CK8、CK18、CK12表达呈阳性。对照组兔眼角膜均混浊、水肿，荧光显微镜下无荧光表达，且部分组织的部分区域有CK8、CK18表达，无CK12表达。
结论 增强型绿色荧光蛋白基因修饰的人羊膜上皮细胞构建的复层上皮细胞-角膜基质移植材料能较好地重建角膜缘干细胞缺乏的兔眼角膜表层，其可能是组织工程角膜表层一种新的细胞来源，且慢病毒载体是一种安全有效的基因转移工具。