目的 探讨体外诱导大鼠颅神经嵴干细胞向角膜内皮细胞分化的方法，并将其应用于组织工程角膜内皮的构建。

方法 常规方法培养大鼠角膜内皮细胞，于细胞生长至80-90%满时收集24小时条件培养基。原代培养大鼠颅神经嵴干细胞，筛选适宜的条件培养基诱导比例。对分化细胞进行形态观察，细胞免疫荧光检测角膜内皮细胞分化标记物的表达，实时荧光定量RT-PCR检测内皮细胞分化相关转录因子的表达。利用角膜内皮样细胞及脱细胞猪角膜支架构建组织工程角膜内皮，行HE染色，台盼蓝-茜素红双染，免疫荧光检测功能相关蛋白，内皮泵功能检测及动物移植。

结果 经过适宜条件的诱导，约50%梭形颅神经嵴干细胞转变为多边形样细胞，免疫荧光和实时荧光定量RT-PCR结果同时证实这些细胞发生了角膜内皮样分化。内皮样细胞在脱细胞支架上形成单细胞层，表达内皮功能相关蛋白，角膜肿胀实验证实该组织工程内皮具有泵功能。兔穿透性角膜移植实验显示，术后两周植片表面被再生上皮覆盖，内皮样细胞在动物体能存活良好。

结论 利用大鼠角膜内皮细胞获得的条件培养基可诱导颅神经嵴干细胞分化为内皮样细胞。这些细胞具有类似天然内皮细胞的形态及功能，在组织工程角膜以及角膜内皮相关疾病的研究中具有潜在的应用价值。