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角膜内皮细胞的酶组织细胞化学方法对真空冷冻干燥保存法保存兔角膜的研究         
角膜内皮细胞的酶组织细胞化学方法对真空冷冻干燥保存法保存兔角膜的研究
作者:杨宏伟 陈… 文章来源:中国医科大学第二临床学院眼科 110004 点击数:1320 更新时间:2004/6/12
目的:通过光镜、电镜酶组织细胞化学方法测定兔角膜内皮细胞酶活性,从而判定真空冷冻干燥保存法(冻干法)对于兔角膜内皮细胞活性的影响。 方法:按随机及配对原则将兔眼分为3组,新鲜对照组、冷冻对照组、冻干实验组。冷冻组为对离体兔角膜片进行深低温冷冻保存。冻干组为对离体兔角膜片行真空冷冻干燥保存,将离体的角膜组织经过深低温冷冻使组织内的水分凝结成固态,然后在真空条件下使固态的水升华,冻干的角膜片可冰箱及室温下保存。将冷冻及冻干保存的兔角膜片分别复水及复温后,与新鲜的角膜片同时进行三磷酸腺苷酶(ATPase)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的光镜及电镜酶组织细胞化学染色,观察三组酶的活性是否有差异。 结果:在新鲜对照组、冷冻对照组、冻干实验组中,ATPase 及SDH的酶组织细胞化学染色在光镜观察下均呈阳性反应。冻干组与新鲜组和冷冻组相比,内皮细胞ATPase和SDH酶的内皮细胞酶的活性较低,平均积分光密度值(IOD)差异具有统计学意义(P<0.01)。电镜酶组织细胞化学染色三组样本角膜内皮细胞膜上均有ATPase电子致密颗粒呈线性沉着。SDH电镜未能观察到结果。 结论:冻干保存法可使离体角膜内皮细胞保持一定的活性。与新鲜及冷冻保存的兔角膜相比,活性较低。但可以推测冻干法有可能成为一种新的角膜长期保存方法。
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