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羊膜和结膜基质诱导胚胎干细胞分化的初步研究         
羊膜和结膜基质诱导胚胎干细胞分化的初步研究
作者:黄丹平,… 文章来源:中山大学中山眼科中心 510060 点击数:1162 更新时间:2004/6/13
目的 观察小鼠胚胎干细胞在人羊膜及兔眼表结膜基质上分化发育的情况。 方法 将表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)基因的小鼠ES-GFP细胞接种到人羊膜上共培养4天,用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记后移植到新西兰兔眼表结膜缺损区,分别于移植后1,2,3,4,6和8周,摘取各组实验眼行荧光显微镜、组织学和免疫组织化学检查,荧光检测ES-GFP细胞在组织中的荧光表达,组织学检查移植到结膜基质的ES-GFP细胞的存活、形态变化以及移植局部的反应等情况;免疫组织化学检测移植到结膜基质的带有BrdU标记的ES-GFP细胞CK3/CK12和CK13的表达。 结果 小鼠ES-GFP细胞接种到人羊膜后能在羊膜上贴附生长,与羊膜共培养4天后部分ES-GFP细胞分化为多角形细胞,将负载有ES-GFP细胞的羊膜移植到兔结膜缺损区, 术后荧光显微镜可在结膜上皮层检测到绿色荧光带, 免疫组织化学检测结膜上皮层CK13表达阳性,CK3/CK12表达阴性,在重建的结膜上皮层可检测到BrdU核阳性细胞,未见异常增殖细胞。 结论 采用人羊膜负载小鼠ES细胞行兔结膜移植,小鼠ES细胞能在兔结膜基质存活并分化为结膜上皮样细胞。
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