叔丁基过氧化氢对小梁细胞氧化应激的研究

目的建立小梁细胞（iHTM）的叔丁基过氧化氢（tBHP）氧化应激模型，观察氧化应激后小梁细胞活性、细胞活性氧、糜蛋白酶样蛋白酶体复合物活性以及细胞凋亡的变化。
方法体外培养正常小梁细胞系（iHTM），应用t-BHP刺激小梁细胞1和2h个小时，然后利用MTT法检测氧化损伤后小梁细胞的活性；流式细胞术检测小梁细胞活性氧水平；Suc-LLVY-荧光底物小梁细胞糜蛋白酶样蛋白酶体的活性；流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测小梁细胞的凋亡。
结果正常人培养的小梁细胞呈梭形，折光性好，贴壁较牢；tBHP处理1h后部分细胞变圆，脱落，皱缩；tBHP处理2h后，大部分细胞变圆，皱缩，漂浮于培养液中。tBHP处理1h后，细胞活性较处对照组下降30.70% ± 1.5%；小梁细胞活性氧水平较对照组升高53.47 ± 1.75倍；小梁细胞糜蛋白酶样蛋白酶体的活性较对照组下降70.59% ± 0.88%。tBHP处理2h后，细胞活性下降42.12% ± 2.2%；小梁细胞活性氧水平较对照组升高121.81 ± 4.2倍；小梁细胞糜蛋白酶样蛋白酶体的活性较对照组下降74.93% ± 0.54%。正常人培养的小梁细胞凋亡细胞较少；经过tBHP处理1h，可见凋亡细胞增加，经tBHP处理2h，凋亡细胞增多更加明显。流式细胞术检测小梁细胞凋亡比例，对照组为3.0%±1.8%，经tBHP处理1h，凋亡细胞比例为28.23% ± 3.23%；tBHP处理2h，凋亡细胞比例为39.20% ± 5.91%（均P=0.000）。
结论培养的人小梁细胞经过tBHP刺激后，小梁细胞的细胞活性明显下降，活性氧水平升高，糜蛋白酶样蛋白酶体活性降低，细胞凋亡水平明显增加。随着刺激时间的延长，上述改变更为明显。