最新公告:

  没有公告

您现在的位置: 心灵之窗-眼科医生网 >> 眼科常识 >> 第16届全国会 >> 正文
专题栏目
更多内容
相关文章
更多内容
靶向TGF-betaⅡ型受体的核酸适配子阻抑TGF-beta介导人Tenon囊成纤维细胞表型转化           ★★★
靶向TGF-betaⅡ型受体的核酸适配子阻抑TGF-beta介导人Tenon囊成纤维细胞表型转化
作者:朱晓燕 文章来源:第三军医大学大坪医院眼科专科医院 点击数:238 更新时间:2011/9/13

目的  TGF-b(Transforming Growth Factor b)介导Tenon囊成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,是纤维化过程重要的调控因子。本研究通过筛选靶向TGF- bⅡ型受体胞外段(rhTGF-b sRⅡ)的核酸适配子,并在体外实验探讨其阻抑TGF-b介导的成纤维细胞转分化过程。 
方法  体外设计、合成长度为108nt、包含60个随机核苷酸序列的ssDNA随机库,与靶蛋白rhTGF-b sRⅡ行SELEX筛选,将筛选得到的ssDNA克隆、测序,利用膜结合实验检测核酸适配子与靶蛋白的亲合力。原代培养人Tenon囊成纤维细胞,分组处理细胞:正常对照组,TGF-b2(2ng/ml)刺激组,TGF-b2(2ng/ml)与核酸适配子S58/68共同作用组,核酸适配子S58/68作用组,采用Western blot检测平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin, a-SMA)、pSmad2蛋白表达变化,应用共聚焦免疫荧光显微镜观察细胞a-SMA定位表达以及细胞骨架蛋白(F-actin)分布情况。细胞凝胶收缩实验检测细胞收缩力的变化。
结果  经过8轮筛选后,富集库对rhTGF-b sRⅡ的亲和力较初始库明显升高,从0.76%上升到22%。Western blot结果显示TGF-b2作用24h后细胞a-SMA表达明显高于对照组,而与核酸适配子S58共同作用24h后细胞a-SMA表达较TGF-b2作用组显著降低。作用不同时间点(10min,30min,1h,2h)显示S58均能减少TGF-b2介导的pSmad2蛋白表达。细胞凝胶收缩后面积占初始面积的百分比:正常对照组为38%;TGF-b2(2ng/ml)组为22%;S58(20nM)干扰组为41%。
结论  成功建立了SELEX技术筛选rhTGF-b sRⅡ亲和核酸的方法,核酸适配子S58能有效地阻抑TGF-b2介导Tenon成纤维细胞a-SMA蛋白的表达以及细胞收缩,且可能与Smad信号转导途径相关。

 

会议投稿录入:毛进    责任编辑:毛进 
  • 上一篇会议投稿:

  • 下一篇会议投稿:
  • 【字体: 】【发表评论】【加入收藏】【告诉好友】【打印此文】【关闭窗口
      网友评论:(只显示最新10条。评论内容只代表网友观点,与本站立场无关!)

    | 设为首页 | 加入收藏 | 联系站长 | 友情链接 | 版权申明 |
    眼科医生网 眼科医生网版权所有 @ 1998-2012
    部分文章和资源来源于网络,如果侵犯了您的版权,请指出! 站长:毛进
    信息产业部备案
    *京ICP备18030162号