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改良细菌纤维素作为角膜组织工程支架的研究           ★★★
改良细菌纤维素作为角膜组织工程支架的研究
作者:宁燕 文章来源:吉林大学白求恩第一医院眼二科 点击数:228 更新时间:2011/9/13
目的  以细菌纤维素为支架构建组织工程角膜基质,研究其在体内外的生物相容性和降解性。
方法  将大耳白兔角膜基质细胞进行体外分离、培养和扩增后,种植到BC膜上继续培养,细胞爬满后移植到同种同体基质囊袋中。术后定期应用裂隙灯、前节OCT和Cs-4检查移植后兔眼的组织形态学改变和复合膜的降解情况,同时观察兔眼有无炎症反应和新生血管的发生。分别于术后2、5、7个月,用角膜剪无菌摘除右眼角膜,置于4%戊二醛固定,进行HE染色、免疫组化和扫描电镜观察。
结果  兔角膜基质细胞在BC上生长良好。术后1周兔眼无刺激症状,植片处无新生血管。术后1个月可见较深长的新生血管贯穿植片,但角膜未水肿,植片周围的角膜组织透明性有所好转。2个月时,角膜呈半透明,复合膜片大小有所缩减,新生血管较1个月时好转。7个月时角膜新生血管变少变细,其透明性好转。
前节OCT和共焦显微镜检查:移植术后1周角膜基质细胞-BC复合膜密度明显高于正常角膜组织,术后5月时复合膜边界模糊,密度接近正常角膜组织,说明复合膜发生降解。术后2月共焦显微镜显示植片周围的内皮细胞数量和形态大致正常。术后7月基质细胞密度下降,偶见神经纤维。
病理检查:术后5月时,角膜上皮细胞增生,排列紊乱,基质细胞-BC复合膜的纤维结构与正常角膜基质有区别,两者粘连不紧密,有炎细胞浸润,角膜组织无坏死和溶解。术后7月时,角膜上皮细胞仍增生,但排列规整,复合膜内未见空泡,有细胞结构,说明BC没有发生剧烈降解,BC两侧和内部可见与角膜基质细胞相同的细胞结构,周围有少量炎症细胞浸润,角膜组织未见溶解坏死。    
免疫组化检查:移植术后2、5、7月,三只大耳白兔的复合膜均呈现α-SMA染色阳性,说明在体内基质细胞被活化为肌成纤维细胞,但随移植时间的推移,基质细胞的活化数量逐渐减少。扫描电镜显示复合膜与正常角膜组织结构界限清晰,术后7个月时仍能见到复合膜。
结论  BC的细胞相容性良好,构建角膜基质细胞-BC复合膜成功。BC具有可降解性,但BC膜在体内降解速度较慢。角膜新生血管、肌成纤维细胞的增殖与角膜透明性相关。
 
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