目的 研究肿瘤转移抑制基因KAI1对视网膜母细胞瘤细胞株HXO-Rb44和Y79细胞粘附、迁移和侵袭的影响。
方法 用含KAI1的慢病毒载体转染稳定表达GFP和荧光素酶的HXO-Rb44细胞株HXO-Rb44-GFP-luc,联合嘌呤霉素筛选,建立稳定表达KAI1的稳转细胞HXO-Rb44-GlKAI1;以表达GFP的慢病毒载体转染HXO-Rb44-GFP-luc,建立稳转细胞HXO-Rb44-GlGFP,作为HXO-Rb44-GlKAI1的对照细胞。同法建立稳转细胞Y79-GKAI1,Y79-GFP。以PCR和Western blot观察各细胞KAI1的表达情况。光镜下观察上述细胞粘附性的改变。Transwell迁移实验检测HXO-Rb44-GlKAI1、HXO-Rb44-GlGFP和HXO-Rb44-GFP-luc及Y79-GKAI1,Y79-GFP和Y79细胞的迁移能力。Transwell侵袭实验检测上述细胞的侵袭力。
结果 PCR和Western blot显示HXO-Rb44-GlKAI1和Y79-GKAI1细胞强表达KAI1,HXO-Rb44-GlGFP和HXO-Rb44-GFP-luc及Y79-GFP和Y79弱表达KAI1。粘附实验:HXO-Rb44-GlKAI1和Y79-GlKAI1细胞的粘附性明显强于对照细胞。Transwell迁移实验:上室中加入DMEM1640培养基200μl及Rb44细胞100μl,24小时后下室中100倍视野下的细胞数:HXO-Rb44-GlKAI1组平均为17.60±2.52,HXO-Rb44-GlGFP组为 44.75±7.85,HXO-Rb44-GFP-luc组为53.20±7.70(χ2=43.80,P<0.0001)。上室中加入DMEM1640培养基200μl及Y79细胞100μl,48小时后下室中200倍视野下的细胞数:Y79-GKAI1组平均为17.35±4.46,Y79-GFP组为47.05±6.13,Y79组为53.30±5.30(χ2=43.51,P<0.0001)。Transwell侵袭实验:上室中matrigel胶浓度为20%,上室中加入DMEM1640培养基200μl及Rb44细胞100μl,24小时后下室中100倍视野下的细胞数:HXO-Rb44-GlKAI1组平均为4.60±2.70,HXO-Rb44-GlGFP组为33.65±12.70, HXO-Rb44-GFP-luc组为44.70±11.80(χ2=43.07,P<0.0001)。上室中matrigel胶浓度为20%,上室中加入DMEM1640培养基200μl及Y79细胞100μl,48小时后下室中200倍视野下的细胞数:Y79-GKAI1组平均为7.50±3.05,Y79-GFP组为24.40±6.58,Y79组为37.45±7.13(χ2=47.73,P<0.0001)。
结论 KAI1可以显著增强HXO-Rb44和Y79细胞的同质细胞间的粘附力,降低HXO-Rb44和Y79细胞的侵袭力和迁移力。
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