目的 分离纯化视网膜视网膜神经元细胞和小胶质细胞,体外建立Transwell共培养体系,检测内毒素刺激下视网膜神经元细胞和小胶质细胞趋化因子MCP-1和Fractalkine的表达及视网膜神经元细胞凋亡情况。
材料和方法 取3天内Wisteria乳鼠,分离纯化视网膜神经元细胞和小胶质细胞。纯化后的细胞经流式细胞仪检测并鉴定细胞纯度。将纯化的视网膜神经元细胞和小胶质细胞分别放入上、下小室构成Transwell共培养体系。 在培养基中加入LPS(内毒素)进行刺激,分别用流式细胞仪术和ELISA检测趋化因子 MCP-1和Fractalkine 的表达,及应用Annexin V/ PI染色流式细胞仪技术检测检测视网膜神经细胞的凋亡。
结果 分离纯化的视网膜神经元细胞和小胶质细胞的纯度分别达92%和98%。在体外Transwell共培养体系中,在LPS刺激下,视网膜神经元细胞分泌MCP-1和Fractalkine上调,视网膜小胶质细胞分泌MCP-1上调,同时视网膜神经元细胞凋亡增加。
结论 LPS可刺激视网膜神经元细胞和小胶质细胞产生趋化因子,导致视网膜神经元细胞凋亡。Transwell培养体系可作为细胞间相互作用的非常理想的体外研究模式。
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