目的 研究内源性血管抑制因子内皮抑素(Endostatin)与血管内皮生长抑制因子(VEGI)融合基因(hENDO-sVEGI)对兔角膜新生血管(Corneal Neovascularization CNV) 的协同抑制作用。
方法 293A细胞扩增携带融合基因的重组腺病毒(Ad-hENDO-sVEGI),细胞半数感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度。缝线诱导法建立兔炎症性角膜新生血管动物模型,以PBS、Ad-LacZ和Ad-VEGI151为对照组,结膜下注射治疗,缝线后隔天观察并测量CNV生长面积;于缝线后12d和21d取CNV角膜标本行病理学检查,计算新生血管密度;酶免疫组织化学切片(LSAB法)检测组织中融合基因的表达情况。
结果 TCID50法测定粗制病毒液滴度为2×108pfu/ml。免疫组化结果显示,融合蛋白可在体内表达;注射Ad-hENDO-sVEGI组的角膜新生血管面积及密度与各对照组差异显著。
结论 Ad-hENDO-sVEGI在体内能有效表达具生物学活性的融合基因产物,对炎症性角膜新生血管的形成具有明显的抑制作用,且较单基因产物抑制作用更强,提示使用血管生长抑制因子的融合基因治疗CNV更具临床应用价值。 |