目的 重组有活性的人αB-晶体蛋白,探讨其静脉注射对视神经损伤后视网膜神经节细胞(RGCs)的保护作用。
方法 建立人αB-晶体蛋白基因载体质粒,通过大肠杆菌表达系统诱导表达,并利用免疫印迹,胰岛素实验鉴定结构和活性。建立大鼠视神经钳夹损伤模型,静脉注射重组人αB-晶体蛋白,通过荧光金逆行标记和b-Ⅲ-tubulin免疫荧光染色方法,分别于损伤后2周和4周定量分析各组RGCs数量,闪光视觉诱发电位检测评估大鼠视功能,并利用行为学和重要脏器的组织病理学方法,评估静脉应用重组人αB-晶体蛋白的安全性。
结果 通过BL21大肠杆菌细胞表达系统可以得到高纯度有分子伴侣活性的重组人αB-晶体蛋白。视神经钳夹伤后,静脉注射重组人αB-晶体蛋白组在损伤后2周和4周与对照组相比均有较多的具有轴浆运输功能的RGCs存活,统计学差异显著(P<0.05) 。视神经钳夹伤后2周重组人αB-晶体蛋白组较生理盐水组闪光视觉诱发电位示P1波波幅较大,差异显著。视神经钳夹伤后4周,两组行为学检测无显著性差异,组织病理学检查未见明显异常。
结论 重组人αB-晶体蛋白在视神经损伤后修复中发挥重要作用。通过静脉多次注射,可明显减少视神经损伤引起的RGCs死亡,保存更多有轴浆运输功能的RGCs,并不引起重要脏器病理学和行为学改变,提示重组人αB-晶体蛋白对促进视神经损伤修复安全有效,为视神经损伤治疗带来新的思路。 |