目的 探讨生长相关蛋白-43（GAP-43）基因沉默对视网膜干细胞（RSCs）及神经干细胞（NSCs）向神经样细胞定向分化的影响并相互比较。
方法 应用测序分析鉴定已构建的pGCsilencer^TM U6/Neo/GFP/GAP-43shRNA载体的正确性。取出生10d大鼠睫状体区组织扩增RSCs；取出生当天大鼠脑组织培养NSCs，体外扩增两种干细胞至第2代，经免疫荧光染色检测干细胞标志nestin及增殖标记BrdU进行鉴定。通过脂质体转染法将GAP-43-shRNA载体导入两种干细胞，G418筛选1周后应用5%血清诱导细胞分化，观察细胞的形态学变化，分别应用免疫细胞化学、RT-PCR及Western blot方法检测诱导后第7日细胞中GAP-43mRNA及蛋白的抑制情况。并应用免疫细胞化学染色计数及荧光实时定量PCR方法检测神经元标志物NSE、βⅢ-tubulin及神经胶质细胞标志物GFAP的表达，分别应用χ² 检验及t检验进行分析、比较 GAP-43基因沉默后RSCs及NSCs诱导分化及表达神经标志物程度的差异。
结果 经测序证明载体基因序列正确。第2代RSCs及NSCs具有典型的细胞形态并均表达nestin及BrdU。分别将GAP-43-shRNA载体导入两种干细胞，经筛选及诱导分化后用上述各种方法可检测到GAP-43mRNA及蛋白表达受到抑制，并且分化的细胞表现出形成神经细胞的突起明显受阻，形成典型神经样细胞数量减少，NSCs表现的更为明显；在两种干细胞分化后NSE染色阳性细胞的比例及NSE、βⅢ-tubulin标志物mRNA相对含量均下降(部分差异具有显著性，P<0.05)，GFAP阳性细胞计数及mRNA水平变化无显著性（P>0.05）。
结论 GAP-43基因沉默后RSCs及NSCs向神经元样细胞分化受到明显抑制，证明GAP-43对于两者分化过程具有促进作用，从形态学分析，NSCs所受GAP-43基因沉默的影响大于RSCs。